Luận văn Nghiên cứu tuyển chọn các chủng vi khuẩn có khả năng sinh Indol Acetic Acid (IAA) tại xã Cưm’Lan, huyện Easoup, tỉnh Đăk Lăk

pdf

95 trang yendo 5461

Download

Bạn đang xem 20 trang mẫu của tài liệu "Luận văn Nghiên cứu tuyển chọn các chủng vi khuẩn có khả năng sinh Indol Acetic Acid (IAA) tại xã Cưm’Lan, huyện Easoup, tỉnh Đăk Lăk", để tải tài liệu gốc về máy bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên

Tài liệu đính kèm:

luan_van_nghien_cuu_tuyen_chon_cac_chung_vi_khuan_co_kha_nan.pdf

Nội dung text: Luận văn Nghiên cứu tuyển chọn các chủng vi khuẩn có khả năng sinh Indol Acetic Acid (IAA) tại xã Cưm’Lan, huyện Easoup, tỉnh Đăk Lăk

B GIÁO DC VÀ ĐÀO TO TRƯNG ĐI HC TÂY NGUYÊN CAO BÌNH NGHIÊN CU TUYN CHN CÁC CHNG VI KHUN CĨ KH NĂNG SINH INDOL ACETIC ACID (IAA) TI XÃ CƯM’LAN, HUYN EASOUP, TNH ĐĂK LĂK LUN VĂN THC SĨ SINH HC BUƠN MA THUT, NĂM 2010
B GIÁO DC VÀ ĐÀO TO TRƯNG ĐI HC TÂY NGUYÊN CAO BÌNH NGHIÊN CU TUYN CHN CÁC CHNG VI KHUN CĨ KH NĂNG SINH INDOL ACETIC ACID (IAA) TI XÃ CƯM’LAN, HUYN EASOUP, TNH ĐĂK LĂK CHUYÊN NGÀNH SINH HC THC NGHIM Mã s: 60.42.30 LUN VĂN THC SĨ SINH HC Ngưi HDKH: TS. Võ Th Phương Khanh BUƠN MA THUT, NĂM 2010
LI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đây là cơng trình nghiên cu ca riêng tơi. Các s liu, kt qu nêu trong lun văn là trung thc và chưa đưc ai cơng b trong bt kỳ mt cơng trình nào khác. BMT, ngày 28/11/2010 Ngưi cam đoan Cao Bình
LI CM ƠN Đ hồn thành lun văn tt nghip này, tơi xin bày t lịng bit ơn chân thành và sâu sc đn: TS. Võ Th Phương Khanh, ngưi đã dy d, gn gũi, tn tình hưng dn, to mi điu kin thun li, giúp đ tơi trong sut thi gian hc tp ti trưng cũng như thi gian thc hin đ tài. Ban giám hiu cùng tồn th quý phịng ban đã to điu kin thun li cho tơi trong hc tp và hồn thành lun văn tt nghip. Quý thy cơ trong trưng, các thy cơ trong khoa Khoa hc t nhiên và cơng ngh, đc bit là các thy cơ trong b mơn Sinh đã trang b cho tơi nhng kin thc quý báu trong sut ba năm hc tp và rèn luyn dưi mái trưng Đi hc Tây Nguyên. Các thy cơ giáo, cán b, nhân viên qun lý phịng thí nghim đã to điu kin tt nht đ cho tơi hồn thành đ tài ca mình. Cui cùng, cho phép tơi gi li cm ơn sâu sc đn gia đình, bn bè gn xa, đc bit là các bn hc viên lp Sinh hc thc nghim K2 đã đng viên, giúp đ tơi trong sut thi gian thc hin đ tài. Xin chân thành cm ơn! BMT, ngày 28/11/2010 Hc viên Cao Bình
MC LC Trang M ĐU .1 1.1. Đt vn đ .1 1.2. Mc tiêu ca đ tài 2 1.3. Ý nghĩa khoa hc và thc tin .2 1.3.1 Ý nghĩa khoa hc .2 1.3.2. Ý nghĩa thc tin .2 1.4. Gii hn ca đ tài 2 PHN I. TNG QUAN TÀI LIU 3 1.1 .Đi cương v các chng vi khun sinh .3 1.1.1. Vi khun Azotobacter sp .4 1.1.2. Bradyrhizobium . .5 1.1.3. Azospirillum .6 1.1.4. Vi khun Rhizobium sp .7 1.2. S hình thành và vai trị ca IAA .8 1.2.1. Sơ đ cu to ca IAA .9 1.2.2. S phân b ca IAA .9 1.2.3 Sinh tng hp IAA .9 1.3. Tình hình nghiên cu 11 1.3.1. Tình hình nghiên cu trong nưc . 11 1.3.2. Tình hình nghiên cu trên th gii 12 PHN II NI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU 14 2.1. Ni dung nghiên cu 14 2.2. Vt liu và đa đim nghiên cu 14 2.2.1. Vt liu nghiên cu 14 2.2.2. Đa đim nghiên cu 14
2.2.3. Thi gian nghiên cu 14 2.3. Phương pháp nghiên cu . 14 2.3.1. Phương pháp thu mu 14 2.3.2. Phương pháp phân lp 15 2.3.3. Phương pháp mơ t đc đim hình thái khun lc và t bào các vi khun sinh IAA phân lp . 15 2.3.4. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun phân lp .15 2.3.5. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun tuyn chn trong các mơi trưng nuơi cy khác nhau. 17 2.3.6. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun tuyn chn trong các mơi trưng cĩ nng đ Tryptophan khác nhau 17 2.3.7. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun theo thi gian nuơi cy. 18 2.3.8. Phương pháp nghiên cu nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun 2.3.9. sinh IAA tuyn chn đn quá trình ny mm ca ht đu tương 18 PHN III. KT QU VÀ THO LUN 19 3.1. Mơ t đc đim hình thái khun lc và t bào các vi khun sinh IAA phân lp ti Easup – Đăk Lăk 19 3.2. Đánh giá kh năng sinh IAA ca các chng vi khun phân lp 27 3.3. nh hưng ca mt s yu t đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn . . 30 3.3.1. nh hưng ca mơi trưng nuơi cy 31 3.3.2.nh hưng ca nng đ tryptophan . .34 3.3.3. nh hưng ca thi gian nuơi cy . .36 3.4. Kho sát nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn quá trình ny mm ca ht đu tương 38 3.4.1. nh hưng đn s ny mm ht đu tương 39 3.4.2. nh hưng đn s sinh trưng r mm đu tương 40
3.4.3. nh hưng đn sinh trưng ca thân mm 42 3.4.4. nh hưng đn trng lưng khơ ca r đu tương 43 PHN IV. KT LUN VÀ KIN NGH 45 4.1 Kt lu 45 4.2 Kin ngh 46 TÀI LIU THAM KHO 47
DANH MC CÁC CH VIT TT STT Ch vit tt Ch vit đy đ 1 VK Vi khun 2 Tryp Tryptophan 3 IAA Acid indol acetic 4 MT Mơi trưng 5 dd Dung dch 6 Nđ Nng đ 7 CT Cơng thc 8 TBC Trung bình cng
DANH MC HÌNH Trang Hình 3.1: Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng và nt sn đu tương .21 Hình 3.2: Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng và nt sn đu phng 23 Hình 3.3: Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng và nt sn đu cơ ve 24 Hình 3.4: Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng ngơ 26
DANH MC BNG Trang Bng 3.1. Đc đim khun lc và t bào ca vi khun phân lp t đt trng và nt sn cây đu tương . . 20 Bng 3.2. Đc đim khun lc và t bào vi khun phân lp t đt trng và nt sn cây đu phng .22 Bng 3.3. Đc đim khun lc và t bào vi khun phân lp t đt trng và nt sn cây đu cơ ve . . 24 Bng 3.4. Đc đim khun lc và t bào vi khun phân lp t đt trng ngơ 27 Bng 3.5: Kh năng sinh IAA ca các chng vi khun phân lp .28 Bng 3.6: nh hưng ca mơi trưng nuơi cy đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn 32 Bng 3.7: nh hưng ca nng đ tryptophan đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun 35 Bng 3.8: nh hưng ca thi gian đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn . 37 Bng 3.9: nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn s ny mm ca ht đu tương 39 Bng 3.10: nh hưng ca dung dch vi khun sinh IAA đn sinh trưng ca r đu tương 41 Bng 3.11: nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn sinh trưng ca thân mm đu tương 42 Bng 3.12: nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn trng lưng ca r đu tương . 43
DANH MC BIU Đ Trang Biu đ 3.1: Kh năng sinh IAA ca các chng vi khun trên mơi trưng YMA 29 Biu đ 3.2: nh hưng ca mơi trưng nuơi cy đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn . .32 Biu đ 3.3: nh hưng ca nng đ tryptophan đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun . .35 Biu đ 3.4: nh hưng ca thi gian nuơi cy ca các chng vi khun đn kh năng sinh IAA . 37
M ĐU 1.1. Đt vn đ Đăk Lăk là mt tnh cĩ tim năng phát trin nơng nghip vi tng din tích t nhiên 1.308.500 ha, trong đĩ đt nơng nghip chim 436.000 ha (chim 33% tng din tích ) và thích hp cho nhiu loi cây trng. Trong nhng năm qua dưi tác đng ca thi tit, khí hu, canh tác làm cho đt b ra trơi và xĩi mịn rt ln. Trình đ dân trí, khoa hc k thut và điu kin kinh t ca ngưi dân tham gia canh tác cịn thp. Mt s nơi k thut canh tác ch yu da vào đ phì sn cĩ ca đt hoc lm dng quá mc vic s dng phân bĩn hố hc làm đt xu đi, mt cân đi các cht dinh dưng, b chai cng và làm gim h vi sinh vt cĩ ích. Đây là các nguyên nhân chính làm năng sut cây trng gim, nguy cơ dch bnh cao dn đn đt mt kh năng canh tác [3]. Mt trong nhng gii pháp đang đưc áp dng hin nay đ ci to đt là s dng phân bĩn cĩ cha vi sinh vt. Nhĩm vi sinh vt trong phân bĩn cĩ tác dng ci thin đ phì, cân bng dinh dưng trong đt, ci thin dung tích hp thu, ci thin các tính cht lý, hố ca đt và đc bit làm hn ch ơ nhim mơi trưng đt cũng như mơi trưng nưc do quá trình ra trơi [3]. H vi sinh vt tham gia trong thành phn phân vi sinh bao gm các nhĩm vi sinh vt phân gii các hp cht hu cơ phc tp như cellulose, lignin, chitosan; nhĩm vi sinh vt phân gii phosphat khĩ tan, nhĩm vi sinh vt c đnh đm. Các nhĩm vi sinh vt này đu cĩ mt trong đt cũng như trong các vt liu. Theo nghiên cu ca các nhà khoa hc, trong đt cịn cĩ mt nhĩm các vi sinh vt cịn cĩ kh năng sn sinh cht kích thích sinh trưng cho cây trng, đĩ là kh năng sinh tng hp IAA (indol acetic acid). Nhng vi khun thuc chi Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum, Bradyrhizobium, Pseudomonas, Bacillus cĩ kh năng này [1,2,11,24].
Đ đm bo s phát trin nn canh tác nơng nghip bn vng ti Tây Nguyên, vic khai thác, s dng và bo tn các chng vi sinh vt cĩ giá tr cho đt và cây trng là vic làm ht sc cn thit. Trên cơ s thc t đĩ, chúng tơi tin hành nghiên cu đ tài “ Phân lp và tuyn chn các chng vi khun sinh IAA trong đt ti xã CưM’Lan, huyn EaSoup, tnh Đk Lk” . 1.2. Mc tiêu ca đ tài Phân lp và tuyn chn các chng vi khun cĩ kh năng to IAA trong đt ti xã CưM’Lan, huyn Easoup, tnh Đăk Lăk. 1.3. Ý nghĩa khoa hc và thc tin 1.3.1. Ý nghĩa khoa hc Thu thp các chng vi khun trong mơi trưng đa phương cĩ kh năng to IAA cht kích thích sinh trưng ca thc vt, đ bo tn s đa dng sinh hc ca vi khun cĩ giá tr trong mơi trưng. 1.3.2. Ý nghĩa thc tin Tuyn chn và đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun trong đt là bưc đu trong cơng vic làm phong phú các đi tưng vi sinh vt cĩ li cho cây trng. T đĩ gĩp phn nâng cao hiu qu sn xut trong nơng nghip, gĩp phn gim lưng phân bĩn hố hc, gim lưng cht kích thích sinh trưng trong đt, gĩp phn bo v mơi trưng. 1.4. Gii hn ca đ tài Là hc viên ln đu tham gia nghiên cu khoa hc, thi gian thc hin đ tài cĩ hn nên chúng tơi ch nghiên cu nhng mc tiêu đã đ ra. Trong quá trình nghiên cu khơng th tránh khi nhng thiu sĩt, kính mong quý thy cơ và các bn đĩng gĩp ý kin đ đ tài đưc hồn thin hơn.
PHN I. TNG QUAN TÀI LIU 1.1. Đi cương v các chng vi khun sinh IAA T c xưa, mc du chư nhn thc đưc s tn ti ca vi sinh vt, nhưng lồi ngưi đã bit khá nhiu v tác dng do vi sinh vt gây nên. Trong sn xut và trong đi sng, con ngưi đã tích lũy đưc nhiu kinh nghim v các bin pháp li dng các vi sinh vt cĩ ích và phịng tránh các vi sinh vt cĩ hi. Vi sinh vt sng khp mi nơi trên Trái Đt, t đnh núi cao đn tn đáy bin sâu, trong khơng khí, trong đt , trong hm m, trong sơng ngịi, ao h, trên da, trong thc phm, vt liu Vi sinh vt là nhng sinh vt cĩ cu to đơn gin, kích thưc rt nh bé mt thưng khĩ cĩ th quan sát đưc, tuy nhiên s lưng ca chúng thì vơ cùng ln. Vi khun là mt nhĩm sinh vt cĩ s lưng ln trong th gii vi sinh vt. Phn ln chúng s dng ngun dinh dưng đm t mơi trưng đt hay xác bã thc vt và đc bit cĩ mt s lồi vi khun cĩ kh năng s dng nitơ t khơng khí. Nhng sinh vt này cĩ vai trị vơ cùng quan trng đi vi sn xut nơng nghip và con ngưi. Nh cĩ chúng, thc vt trên hành tinh cĩ thêm ngun dinh dưng đm cho hot đng sinh trưng và phát trin (Hồng Lương Vit 1978). Ngồi ra, theo nghiên cu ca các nhà khoa hc, cĩ mt s vi sinh vt cịn cĩ kh năng sinh tng hp IAA là cht sinh trưng thc vt. Nhng vi khun này đa s đu là nhng vi khun c đnh đm. Đĩ là vi khun thuc chi Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum,Bradyrhizobium, Pseudomonas, Bacillus [1,2,11,24 ]. 1.1.1. Vi khun Azotobacter sp
Azotobacter là vi khun gram âm, hiu khí sng t do trong đt, khơng sinh bào t, cĩ kh năng c đnh nitơ phân t. Mt s chng thuc chi này cĩ kh năng sinh tng hp nên IAA, cht kích thích sinh trưng thc vt [5, 28, 27]. Vi khun Azotobacter T bào Azotobacter cĩ hình cu hoc hình que. Khi cịn non, t bào thưng cĩ hình que, chúng sinh sn theo hình thc gin đơn, di đng nh tiêm mao. Bên cnh các tiêm mao khá dài khi quan sát dưi kính hin vi đin t cịn thy rõ nhng si khun mao nh bé. V già, t bào Azotobacter mt kh năng di đng, kích thưc thu nh dng hình cu đưc bao bc bi mt lp màng nhy khá dày và to thành nang xác. Khi gp điu kin thun li nang xác s nt ra và to thành các t bào vi khun mi. Khun lc ca Azotobacter dng hình cu li, nhy, nhn, cĩ khi nhăn nheo. Khi già cĩ màu vàng lc, hng, nâu đen, đây cũng là mt tiêu chun phân loi lồi Azotobacter sp . Azotobacter sp cn pH thích hp vào khong 7.0 – 8.2, chúng ít tn ti trong mơi trưng đt chua cĩ pH < 5.6 – 5,8 [2]. Azotobacter cĩ biên đ nhit khá rng trong khong 27 – 33 oC, chúng sinh trưng tương đi chm 25 0C và hu như khơng phát trin cn 20 0C và cn 40 0C. Chúng phát trin ti ưu nhit đ 30 0C [17].
Trong đt, Azotobacter sp tp trung vùng gn r cây cĩ tác dng làm tăng cưng thc ăn Nitơ cho cây trng. Đng thi tác dng ca Azotobacter sp đi vi cây trng cịn đưc chng minh kh năng kích thích sinh trưng ca chúng như tác dng kích thích s ny mm và sinh trưng ca mm ht. Azotobacter sp cĩ kh năng tit vào mơi trưng các vitamin, axit amin cũng như các cht kích thích sinh trưng thc vt (axit indol axetic, gibberelic) [20, 28]. 1.1.2. Bradyrhizobium Bradyrhizobium Nt sn trên r Bradyrhizobium là vi khun cĩ kh năng c đnh nitơ cng sinh cây h đu, cịn đưc gi là vi khun nt sn [27]. Trên mơi trưng đc, khun lc ca chúng cĩ dng trơn bĩng, nhy, khơng màu, đưng kính khun lc khơng quá 1mm [4]. Bradyrhizobium là vi khun hiu khí, tuy nhiên chúng cĩ th phát trin đưc ngay c trong trưng hp ch cĩ mt áp lc oxy rt thp khong 0.01 atm. Chúng phát trin thích hp pH = 6.5 – 7.5. S sinh trưng ca chúng b cn tr khi pH h thp đn 4.5 – 5.0 hoc nâng lên đn 8.0. Nhit đ phát trin thích hp đi vi vi khun là 24 26 0C, nhit đ 37 0C s phát trin ca chúng b cn tr mt cách rõ rt [4].
Ngồi kh năng c đnh nitơ nhĩm vi khun này cịn cĩ kh năng sinh tng hp IAA, thúc đy cây sinh trưng bi quá trình kích thích gia tăng đt bin các r th cp, hình thái lơng r, kéo dài r [17, 23, 14]. 1.1.3. Azospirillum Azospirillum brasilense ATCC 29145 nuơi cy trên mơi trưng agar MPSS 30 0C trong 24 gi đ phĩng đi 15000 ln (Krieg, 1984). Azospirillum là vi khun cĩ dng phy, xon, sng t do, cĩ kh năng c đnh nitơ phân t, đưc phát hin t năm 1974 [23]. Nhng vi khun thuc ging Azospirillum là nhng vi sinh vt c đnh đm sng t do hoc kt hp vi r ca cây ngũ cc và mt s loi c [27]. Chúng là nhng vi khun Gram âm, hơi cong như hình du phy (vibrio) hoc là xon khun, đưng kính 1 m và dài 2,13,8 m, chuyn đng trong mơi trưng lng bi 1 tiên mao dài đu (polar flagellum). Trong mơi trưng đc, 30 0C nhiu tiên mao bên (lateral flagella) ngn hơn cũng đưc thành lp. Nhng ht Polyβhydroxybutyrate (PHB) cĩ màu hng lp đy hu ht nhng t bào vi khun và khun lc [27, 28]. S tăng sinh Azospirillum xy ra dưi c 2 điu kin hiu khí và k khí, nhưng thích hp hơn là điu kin vi hiu khí vi s hin din hoc khơng cĩ hp
cht nitơ trong mơi trưng [29]. Nhit đ ti thích cho vi khun phát trin là 35 37 0C. Nhng khun lc Azospirillum trên mơi trưng khoai tây agar cĩ màu hng nht hoc đm, thưng cĩ np gp và khơng cĩ cht nhy, dinh dưng bng hp cht hu cơ. Mt s dịng Azospirillum là nhng sinh vt t dưng khơng bt buc. Vi khun Azospirillum phát trin tt trên mui ca nhng acid hu cơ như: malate, succinate, lactate hoc pyruvate. Fructose và nhng đưng đơi khác cũng cĩ th đưc vi khun s dng là ngun carbon, đc bit vi khun khơng s dng đưng đơn. Mt s dịng Azospirillum cn biotin cho s phát trin ca chúng [19]. Azospirillum sng thành tp đồn vùng r ca nhiu lồi thc vt trong khu vc nhit đi và cn nhit đi. Ngồi kh năng c đnh nitơ chúng cịn cĩ kh năng kh nitrat, chng li vi khun gây bnh thi lá cây dâu tm [12]. Azospirillum cĩ kh năng sinh tng hp các hoormon tương t các hoormon sinh trưng thc vt như IAA (indol acetic acid), gibberelin, cytokinin [27]. Azospirillum cĩ th kích thích thc vt sinh trưng bi s kích thích hình thành r, tăng đ dài r [15, 17]. 1.1.4. Vi khun Rhizobium sp Rhizobium Nt sn trên r cha vi khun Vi khun Rhizobium là vi khun c đnh Nitơ cng sinh vi r cây b đu cịn gi là vi khun nt sn, đưc phân lp vào năm 1888. Chúng hình thành nhng
nt sn r cây b đu, đơi khi c phn thân cây rt gn vi đt và cư trú trong đĩ [23]. Trong quá trình phát trin vi khun nt sn thưng cĩ s thay đi hình thái. Lúc cịn non đa s các lồi cĩ hình que, cĩ kh năng di đng bng đơn mao, chùm mao hoc chu mao tùy tng lồi. Sau đĩ tr thành dng gi khun th, cĩ hình que phân nhánh, mt kh năng di đng. dng này, vi khun nt sn cĩ kh năng c đnh Nitơ. Khi già dng hình que phân nhánh phân ct to thành dng hình cu nh [23]. Vi khun nt sn thuc loi hiu khí, ưa pH trung tính hoc hơi kim, thích hp vi nhit đ t 28 0C đn 30 0C, đ m 60 80%. Chúng cĩ kh năng đng hĩa các ngun cacbon khác nhau như các loi đưng đơn, đưng kép, acid hu cơ, glycerin. Đi vi ngun nitơ, khi cng sinh vi cây đu, vi khun nt sn cĩ kh năng s dng nitơ khơng khí. Khi sng tim sinh trong đt hoc đưc nuơi cy trên mơi trưng, chúng mt kh năng c đnh nitơ, lúc đĩ chúng đng hĩa các ngun nitơ sn cĩ, nht là các ngun amơn và nitrat. Chúng cĩ th đng hĩa tt các loi acid amin, mt s cĩ th đng hĩa pepton [23]. Ngồi ra chúng cịn cĩ kh năng sinh IAA kích thích s sinh trưng và phát trin ca cây trng thơng qua s hình thành lơng r, kéo dài r [23, 14]. 1.2. S hình thành và vai trị ca IAA. Năm 1880, Darwin đã phát hin ra rng bao lá mm ca cây h lúa rt nhy cm vi ánh sáng. Nu chiu sáng mt chiu thì gây quang hưng đng, nhưng nu che ti hoc b đnh ngn thì hin tưng trên khơng xy ra. Ơng cho rng đnh ngn bao lá mm là nơi tip nhn kích thích ca ánh sáng. Năm 1919, Paal đã ct đnh bao lá mm và đt tr li trên ch ct nhưng lch sang mt bên và đ trong ti. Hin tưng un cong xy ra như trưng hp chiu sáng mt chiu. Ơng kt lun rng đnh ngn đã hình thành mt cht sinh trưng nào đy, cịn ánh sáng xác đnh s phân b ca cht đĩ v hai phía ca bao lá mm.
Went (1928) làm thí nghim đt đnh ngn tách ri ca bao lá mm lên bn agar đ các cht sinh trưng khuch tán xung agar, sau đĩ ơng đt bn agar lên mt ct ca bao lá mm thì cũng gây nên hin tưng sinh trưng. Ơng gi cht đĩ là cht sinh trưng và hin nay chính là auxin. Đn năm 1934, giáo sư hĩa hc Kogl ngưi Hà Lan và các cng s đã tách ra mt cht t dch chit nm men cĩ hot cht tương t cht sinh trưng. Năm 1935, Thimann cũng tách đưc cht này t nm Rhysopus , đĩ chính là IAA. IAA là dng auxin ch yu, quan trng nht ca tt c các thc vt, c thc vt bc thp và thc vt bc cao [13]. 1.2.1. Sơ đ cu to IAA. Indole3acetic acid (IAA) 1.2.2. S phân b ca IAA. IAA phân b rng trong th gii t vi khun đn thc vt bc cao. Trong cơ th thc vt bc cao, IAA tp trung nhiu trưc ht trong các chi, lá đang phát trin, trong tng phát sinh, trong ht đang đưc hình thành, trong phn hoa và trong ht đang ny mm. Trong cây nguyên vn thưng auxin cĩ hot tính cao đnh ca cành chính [7]. 1.2.3. Sinh tng hp IAA.
IAA đưc tng hp tt c các thc vt bc cao, to, nm và c vi khun. thc vt bc cao, IAA đưc tng hp ch yu đnh chi ngn và t đĩ đưc vn chuyn xung dưi. S vn chuyn ca auxin trong cây cĩ tính cht phân cc rt nghiêm ngt, tc là ch vn chuyn theo hưng gc. Chính vì vy càng xa đnh ngn, hàm lưng auxin càng gim dn to nên mt gradien nng đ gim dn ca auxin t đnh ngn xung gc ca cây. Ngồi đnh ngn ra thì các b phn non khác ca cây cũng cĩ tính cht như vy [14]. S tng hp auxin din ra thưng xuyên và mnh m trong cây. Quá trình này đưc xúc tác bi hàng lot các enzyme đc hiu. Cht tin thân là acid amine tryptophan. S tng hp IAA din ra theo đưng hưng chung cho hu ht thc vt [14]. Tin cht ca IAA: S tương đng v cu trúc ca acid indol3acetic và acid amin Tryptophan là cơ s cho gi đnh rng auxin cĩ phi đưc tng hp t acid amin đĩ. Gi thuyt này đã đưc chng minh nh phương pháp nguyên t đánh du [7]. Các con đưng sinh tng hp IAA: Phân tích sc ký đã cho phép phát hin ra nhiu con đưng sinh tng hp IAA [9]. RCH 2COOH A. indolaxetic RCH 2CNH 2 ≡ N Indolaxetamit RCH CH OH RCH CHO 2 2 2 Indoletanol Indolaxetaldehit RCH CH NH RCH 2CONH 2 2 2 2 Triptamin Indolaxetamit1.2.4. RCH 2COCOOH RCH 2CHOHCOOH A.indolpiruvic A.indollactic RCH 2CH(=NH)COOH Indolaxetimin RCH 2CH(NH 2)COOH Triptophan
Tác dng sinh lý ca IAA. Hiu ng ca IAA trong cây rt đa dng. IAA điu tit quá trình sinh trưng nhng nơi (cơ quan) khác nhau. IAA cĩ vai trị điu hịa quan trng trong s kìm hãm phát trin ca chi bên (duy trì ưu th đnh) [9]. IAA kích thích qu phát trin, xut phát t ht, IAA điu hịa s phát trin ca qu. mt s lồi, IAA điu hịa s phát trin qu đơn tính, kích thích s phát trin ca qu trong hoa khơng đưc th tinh [9]. IAA nh hưng đn hot tính nguyên phân. Ngồi nh hưng đn các quá trình sinh trưng, IAA cũng tác đng đn hot tính phân bào nguyên nhim trong mt s mơ, như trong tng phát sinh hoc trong nuơi cy mơ [9]. IAA gây ra s phân hĩa các t bào mch g và libe. Xut phát t khong cách xác đnh ti phía dưi ca mơ phân sinh trong cơ quan đang ln và phân hĩa tip tc hưng gc song song vi s di chuyn ca IAA. Trong mt s đon cành ct ri đưc x lý IAA thưng dn ti s hình thành r ph [9]. IAA cịn cĩ kh năng kìm hãm s rng lá, hoa, qu, vì nĩ c ch s hình thành tng ri cung lá, hoa, qu vn đưc cm ng bi các cht kích thích sinh trưng. Ngồi ra nĩ cịn nh hưng lên s vn đng ca cht nguyên sinh, tăng tc đ lưu đng ca cht nguyên sinh, nh hưng đn các quá trình trao đi cht: kích thích s tng hp các polime và c ch s phân hy chúng, nh hưng đn các hot đng sinh lí như quang hp, hơ hp, s vn chuyn vt cht trong cây [13]. Hiu ng đa dng ca IAA trong cây là s minh ha gây n tưng mnh v tác đng hoormone như là nhng kích thích đng ca cơ quan khơng đc hiu hay ca hình mu phn ng ca mơ đc hiu vi trng thái sn sàng phn ng tr li ti nơi tác đng [9]. 1.3. Tình hình nghiên cu 1.3.1. Tình hình nghiên cu trong nưc
Nhiu cơng trình nghiên cu cho thy rng các chng vi khun cĩ kh năng to IAA như vi khun thuc chi Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum, Bradyrhizobium, Pseudomonas, Bacillus đã cho kt qu kh quan [1,2,11,24 ]. Lăng Ngc Du đã nghiên cu kh năng to IAA ca vi khun Azospirillum lipoferum . Ơng tin hành nuơi cy chng vi khun này trong mơi trưng Nfb cĩ b sung Tryptophan, theo dõi ti nhng thi đim khác nhau. Kt qu cho thy ti thi đim ngày th 10 sau khi cy , kh năng to IAA ca vi khun ra mơi trưng cao nht [2]. Năm 2003, Phm Vit Cưng cơng b đ tài nghiên cu v kh năng to IAA ca mt s chng vi khun chi Bacillus . Kt qu cho thy kh năng sinh tng hp IAA ca các chng vi khun nghiên cu thay đi ph thuc rt nhiu vào chng ging, mơi trưng nuơi cy và mt s nhân t khác [1]. Vũ Thuý Nga và các cng s cũng đã nghiên cu s nh hưng ca mt đ vi khun và nh hưng ca mơi trưng nuơi cy đn kh năng sinh tng hp IAA ca vi khun Bradyrhizobium [24 ]. Năm 2003 Phm Bích Hiên, Phm Văn Tồn (Vin khoa hc k thut Vit Nam) đã nghiên cu và tuyn chn đưc mt s chng Azotobacter đa hot tính cĩ kh năng sinh IAA ng dng vào làm phân vi sinh chc năng [15]. 1.3.2. Tình hình nghiên cu trên th gii Trên th gii đã cĩ rt nhiu nghiên cu v các chng vi khun cĩ kh năng sinh IAA, t các chng vi khun sng cng sinh nt sn ca r cây đn các vi khun sng t do trong đt như: Azotobacter, Azospirillum, Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas . Năm 2000, María Guineth TorresRubio (Colombia) cùng cng s đã phân lp đưc mt s chng Azotobacter và Pseudomonas t vùng r cây go cĩ kh năng sinh IAA [21].
E.Somers và cng s (2005) đã nghiên cu kh năng sinh IAA ca vi khun Azospirillum brasilense và cho thy lồi này cĩ kh năng sinh IAA bng cách s dng chìa khĩa enzyme cho vic tng hp [15]. Năm 2006, Sisir Ghoh, P.S. Basu n Đ đã nghiên cu s chuyn hố và sn xut Idole acetic acid trong r và nt sn ca Phaseolus mungo . Kt qu nghiên cu cho thy nhng nt sn trưng thành ca Phaseolus mungo cha hàm lưng IAA cao. Khi tách các vi khun cng sinh trong nt sn và đưc nuơi cy trong mơi trưng thích hp cĩ b sung tryptphan thì chúng cĩ kh năng to IAA cao [24]. Năm 2007, Gh. Abbas Akbari (Iran) và cng s đã phân lp và tuyn chn đưc mt s chng Azospirillum spp cĩ kh năng sinh tng hp IAA kích thích sinh trưng cây lúa mì [17].
PHN II NI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU 2.1. Ni dung nghiên cu Đ đáp ng mc tiêu nghiên cu ca đ tài, chúng tơi nghiên cu các ni dung sau: 1. Phân lp, mơ t đc đim hình thái ca các chng vi khun cĩ kh năng to IAA ti xã CưM’Lan, huyn Easoup, tnh Đăk Lăk. 2. Nghiên cu kh năng to IAA ca các chng vi khun thu thp. 3. Nghiên cu mt s yu t nh hưng đn kh năng to IAA ca các vi khun tuyn chn. 4. Bưc đu kho sát nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn s ny mm ca ht đu tương. 2.2. Vt liu và đa đim nghiên cu. 2.2.1. Vt liu nghiên cu Các mu phân lp vi khun sinh IAA: nt sn và đt trng cây đu cơ ve, cây đu tương, đu phng và đt trng ngơ. Các mu đu đưc thu ti xã CưM’Lan, huyn Easoup, Tnh Đăk Lăk. 2.2.2. Đa đim nghiên cu
Phịng thí nghim b mơn Sinh hc thc nghim Khoa Khoa hc T Nhiên và Cơng ngh, trưng Đi hc Tây Nguyên. 2.3. Phương pháp nghiên cu 2.3.1. Phương pháp thu mu Phương pháp thu mu đt: ly đt quanh r cây và cách mt đt khong 5 cm . Phương pháp thu nt sn: thu nt sn tươi và trưng thành r cây đu tương, đu cơ ve, đu phng. Thu mu bng dng c vơ trùng, ghi nhãn tên mu, đa đim ly mu. Tin hành phân lp vi khun ngay sau khi thu mu. 2.3.2. Phương pháp phân lp Mơi trưng phân lp: Cao nm men 5g, Mannitol 1% 10g, CaCl 2. H2O 0,1% 1g, Tryptophan 100mg, Agar 20g, nưc đ 1000ml. K thut phân lp: sau khi đng nht mu, ly 5g nt sn và đt r cây nghin nh cho vào 95 ml dung dch NaCl 0,1% vơ trùng trong bình tam giác, lc đu 5 phút, thu dch huyn phù ca mu. Pha lỗng dung dch mu theo h s thp phân: dùng pipet cĩ đu type vơ trùng ly 1 ml dung dch huyn phù mu cho vào ng nghim th 1 cĩ cha 9 ml nưc mui NaCl 0,1% vơ trùng, lc trên máy lc sau 5 phút thu đưc dch huyn phù. Tip tc pha lỗng như trên cho đn ng nghim th 7 thu đưc các dch huyn phù cĩ đ pha lỗng khác nhau t 10 1 đn 10 7. Cy 0,1ml dch mi đ pha lỗng vào hp petri mơi trưng vơ trùng và dàn đu. Mi đ pha lỗng thc hin 3 đĩa. đĩa petri nhit đ phịng. Tt c các thao tác phân lp, pha lỗng mu và cy rãi đưc tin hành trong điu kin vơ trùng. Sau 3 ngày nuơi cy, thu thp các khun lc cy ria sang các đĩa mơi trưng phân lp đ thu khun lc đơn theo các dịng riêng bit.
Tin hành gi ging trong ng nghim nhit đ 4 80C. 2.3.3. Mơ t hình thái, màu sc và đc đim khun lc Tin hành quan sát khun lc đơn dưi kính lúp đin và làm tiêu bn ưt quan sát hình thái t bào dưi kính hin vi vt kính 40. Các ch tiêu hình thái mơ t là: dng, cu trúc, b mt, mt ct ngang, mép và màu sc ca khun lc; hình dng t bào. 2.3.4. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun thu thp Thc hin nuơi cy các chng vi khun phân lp đưc trên mơi trưng YMA. Thành phn mơi trưng YMA (g/l): Mannitol 10g, Yeast Extract 0,5g, K2HPO 4 0,5g, MgSO 4.7H 2O 0,25g, NaCl 0,1g, CaCO3 0,5, cơng gơ đ (1g/400ml H2O ) 10ml, nưc ct 1000ml, pH = 7. Chun b mơi trưng lng trong các ng nghim, mi ng nghim 10ml dch mơi trưng, hp kh trùng 1atm, 45 phút. Tin hành nuơi cy các chng vi khun phân lp đưc vào các ng nghim cha mơi trưng đã kh trùng. Nuơi nhit đ phịng, lc 200 vịng/ phút. Sau 5 ngày nuơi cy, tin hành thu dch nuơi cy và li tâm 5500 vịng/ phút và đo lưng IAA đưc vi khun tng hp và tit ra mơi trưng bng phương pháp so màu Salkowski bưc sĩng 530nm. Thí nghim đưc lp li 3 ln. Phương pháp xác đnh phương trình đưng chun ca mi tương quan gia ch s OD 530nm và nng đ IAA. Chun b dung dch đm Phosphat (200ml) A: KH 2PO 4 0,136 g/100ml nưc ct B: K 2HPO 4 0,174 g/100ml nưc ct Ly 39ml A + 61 ml B, thêm nưc ct va đ 200ml, điu chnh pH= 7. Chun b thuc th Salkowski
Ly 553ml H 2SO 4 (98%) và nưc ct, đ 1 lít, đ ngui sau 12 gi đưc dung dch H 2SO 4 đm đc 10,8M. Cân 4,5g FeCl 3 cho vào 1 lít H 2SO 4 10,8M đã pha trên đ đưc thuc th Salkowski. Chun b đưng chun IAA Cân 4mg IAA tng hp hịa tan vi 20 ml dung dch đm phosphat đưc nng đ là 200 mg/l. Sau đĩ tin hành pha lỗng ra các nng đ 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 100mg/l. Ly 4ml thuc th cho vào các ng nghim cĩ nng đ IAA khác nhau cĩ th tích 2ml, mi nng đ lp li 3 ln. 10 phút nhit đ phịng đ phn ng xy ra hồn tồn, sau đĩ tin hành đo OD bưc sĩng 530nm. T kt qu trên, chúng tơi xác đnh đưc phương trình đưng chun ca dung dch IAA thơng qua ch s OD 530nm . Da vào phương trình đưng chun đ xác đnh nng đ IAA (mg/l) trong mơi trưng do các vi khun to ra. 2.3.5. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun tuyn chn trong các mơi trưng nuơi cy khác nhau. Các chng vi khun đưc tuyn chn đưc nuơi cy trên các mơi trưng Nfb, YMA, YEM . Mơi trưng Nfb (g/l): KH 2PO 4 0,5g, MgSO 4.7H 2O 5g, NaCl 0,2g, CaCl 2.2H 2O 0,02g, KOH 4,5g, Biotin 0.01g, acid malic 5g, Bromthymol blue 0,5% trong KOH 0,2N: 3ml, FeEDTA 1,64%: 10ml. Vi lưng: 2ml (MgS0 4.7H 2O 0.2g/l, H 3BO 3 1,4g/l, ZnSO 4 0,12g/l, CuSO 4 0,04g/l, Na 2MoO 4.2H 2O 1g/l). nưc ct vơ đm 1000ml, pH = 6,8.
Mơi trưng YEM (Yeast Extract Mannitol) (g/l): K 2HPO 4 0,5g, MgSO 4 0,8g, NaCl 0,2g, FeCl 3 0,1g, Mannitol 10g, Yeast Extract 1g, nưc ct vơ đm 1000ml, pH = 6,8 7. Nuơi vi khun trong các mơi trưng khác nhau nhit đ phịng, lc 200 vịng/ phút. Sau 5 ngày nuơi cy, tin hành thu dch nuơi cy và li tâm 5500 vịng/ phút và đo lưng IAA đưc vi khun tng hp và tit ra mơi trưng bng phương pháp so màu Salkowski bưc sĩng 530nm. Thí nghim đưc lp li 3 ln. 2.3.6. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun tuyn chn trong các mơi trưng cĩ nng đ Tryptophan khác nhau. Tin hành nuơi cy các chng vi khun đã chn trên mơi trưng đã tuyn chn vi các nng đ Tryptophan phù hp: 0,5 1,0 1,5 2,0 mg/l. Sau 5 ngày nuơi cy tin hành ly tâm thu dch ni và s dng phương pháp so màu Salkowski đ xác đnh kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn. 2.3.7. Phương pháp đánh giá kh năng to IAA ca các chng vi khun theo thi gian nuơi cy. Tin hành nuơi cy các chng vi khun đã chn trên mơi trưng Nfb vi nng đ Tryptophan theo kt qu nghiên cu trên vi thi gian nuơi cy 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ngày. Tin hành ly tâm thu dch trong cho phn ng vi thuc th Salkowski và đo OD bưc sĩng 530nm đ xác đnh thi gian nuơi cy thích hp cho vi khun sinh IAA thơng qua nng đ IAA đưc to ra. 2.3.8. Phương pháp nghiên cu nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA tuyn chn đn quá trình ny mm ca ht đu tương S dng vi khun sinh IAA đã tuyn chn là các chng T5, T6, P5 đ tin hành kho sát nh hưng ca dung dch nuơi cy sinh IAA đn s ny mm ca ht đu tương. Ht đu tương đng đu, nguyên vn vi s ht trong 100g là 347. Tin hành ngâm ht đu tương đã đưc la chn trong dung dch nuơi cy vi khun 5
ngày đã li tâm đ loi b sinh khi. Thi gian ngâm ht 12 gi. Sau đĩ ht đã x lý trên cát ra sch đĩa petri. Phun nưc đ gi m 3 ln/ ngày, mi ln 3ml nưc/ đĩa. Mi đĩa gm 6 ht. Theo dõi s ny mm ca ht, đo chiu dài r mm, thân mm vào các ngày 1, 2, 3, 4, 5 đng thi cân trng lưng khơ ca r mm sau 5 ngày, theo dõi t l nhim bnh ca các ht đu ny mm. Thí nghim đưc tin hành vi lơ đi chng x lý ngâm ht bng nưc, thi gian 12 gi, ươm ht và kho sát như trên. PHN III. KT QU VÀ THO LUN 3.1. Mơ t đc đim hình thái khun lc và t bào các vi khun sinh IAA phân lp ti xã CưM’Lan, huyn Easoup, tnh Đk Lk Sau khi thu mu chúng tơi tin hành phân lp vi khun cĩ kh năng sinh IAA trên mơi trưng phân lp đc hiu, sau 3 ngày nuơi cy tin hành phân lp đ thu dịng thun ca các chng vi khun và thu khun lc đơn bng phương pháp cy ria. Kt qu phân lp đưc 23 chng t các loi mu khác nhau, c th như sau: T đt trng và nt sn cây đu tương: 6 chng vi khun, đưc ký hiu: T1, T2, T3, T4, T5, T6. T đt trng và nt sn cây đu phng: 6 chng vi khun, đưc ký hiu: P1, P2, P3, P4, P5, P6. T đt trng và nt sn cây đu cơ ve: 3 chng vi khun, đưc ký hiu: V1, V2, V3.
T đt trng ngơ: 8 chng vi khun, đưc ký hiu: N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8. Đc đim, hình thái khun lc và t bào ca các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc mơ t theo bng 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, và hình 3.1, 3.2, 3.3, 3.4. Hình thái khun lc và t bào ca các chng vi khun sinh IAA đưc phân lp là nhng tiêu chí đu tiên đ phân loi, nhn din chúng. Đ nghiên cu các chng vi khun sinh IAA đưc phân lp, cn thit phi thu các dịng thun ca các chng. Cĩ 2 phương pháp thu dịng thun vi khun t khun lc đơn là phương pháp pha lỗng và phương pháp cy ria trên mơi trưng thch đĩa petri. Cơng vic đưc thc hin ln lưt cho 23 chng thu thp. Sau đĩ tng chng cĩ khun lc đơn riêng r đưc chp hình dưi kính lúp đin và mơ t như trên. Bng 3.1. Đc đim khun lc và t bào ca vi khun phân lp t đt trng và nt sn cây đu tương. Chng Đc đim khun lc Hình STT vi Mt dng khun Dng Màu sc B mt ct Mép Cu t bào ngang trúc Phc Vàng Bĩng Li Cĩ Dng 1 T1 Que tp nâu li cong thùy ht ln Trịn Trng Bĩng Li Bng Đng 2 T2 Trịn đu sa nhn cong phng nht Trịn Vàng Bĩng Bng Đng 3 T3 Git Que đu cam nhn phng nht 4 T4 Trịn Trng Bĩng Li Bng Đng Que
sa nhn cong phng nht Trng Bĩng Li Bng Đng 5 T5 Trịn Que ngà nhn cong phng nht Vàng Bĩng Li Bng Đng 6 T6 Trịn Trịn rơm nhn cong phng nht Trên đt trng và nt sn ca cây đu tương, vi khun đưc phân lp cĩ th cĩ kh năng c đnh N 2 nhưng da vào mơi trưng đc thù đ phân lp là mơi trưng cĩ b sung tryptophan thì các chng vi khun này đu cĩ kh năng sinh IAA. Tuy nhiên kh năng sinh IAA ca các chng phân lp khơng như nhau, do đĩ sau khi phân lp, vic sàng lc và tuyn chn là điu cn thit. Đc đim hình thái ca các chng vi khun sinh IAA đưc phân lp t đt trng và nt sn cây đu tương đưc ghi nhn qua hình sau:
Chng T1 Chng T2 Chng T3 Chng T4 Chng T5 Chng T6 Hình 3.1. Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng và nt sn đu tương. Sau khi phân lp, các chng vi khun sinh IAA cĩ trong đt trng và nt sn cây đu phng đưc mơ t và ghi nhn bng 3.2 và hình 3.2. Bng 3.2. Đc đim khun lc và t bào vi khun phân lp t đt trng và nt sn cây đu phng Đc đim khun lc Chng Mt Hình STT vi ct Hình dng Màu B mt Mép Cu dng khun ngang sc trúc t bào Trịn cĩ Bĩng Li Bng Đng 1 P1 Trng Trịn vành nhn cong phng
mép nht Bĩng, Đng Trịn Trng Li Bng 2 P2 bng Que khơng đu sa cong phng nhtvv phng Đng Hng Bĩng Bng 3 P3 Trịn đu Git Que sm nhn phng nht Đng Trng Bĩng Li Bng 4 P4 Trịn đu Que sa nhn cong phng nht Bĩng (b Trịn, mép mt cĩ Bng Cĩ Dng 5 P5 vin răng Trng nhng ht Que phng thùy ht ln cưa vàng rơm) Đng Trịn Vàng Bĩng, li Hơi Bng 6 P6 Trịn khơng đu cam cong li phng nht
Chng P1 Chng P2 Chng P3 Chng P4 Chng P5 Chng P6 Hình 3.2. Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng và nt sn đu phng. Bng 3.3. Đc đim khun lc và t bào vi khun phân lp t đt trng và nt sn cây đu cơ ve Chng STT vi Đc đim khun lc Hình khun Mt dng
Hình dng Màu B mt ct Mép Cu t bào sc ngang trúc Trịn Vàng Bĩng Li Bng Đng 1 V1 Trịn khơng đu tươi nhn cong phng nht Trng Bĩng Li Bng Đng 2 V2 Trịn đu Que sa nhn cong phng nht Trịn Trng Cĩ Dng 3 V3 G gh Phng Que khơng đu đc thùy ht ln Chng V1 Chng V2 Chng V3 Hình 3.3. Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng và nt sn đu cơ ve. Bng 3.4. Đc đim khun lc và t bào vi khun phân lp t đt trng ngơ Đc đim khun lc Kí hiu STT Mt Hình Chng dng t
Hình dng Màu B mt ct Mép Cu bào sc ngang trúc Trng 1 N1 Trịn, cĩ trong Li Bng Đng Si Bĩng nhn vành sut cong phng nht Bĩng, 2 N2 Trịn khơng Trng bng Li Cĩ Dng Que đu phng cong thùyhng ht ln Trng Li Bng Địng 3 N3 Trịn đu Bĩng nhn Que sa cong phng nht Trng Bĩng, 4 N4 Gp np trong bng Phng G gh Cun Que sut phng sĩng Trịn mép Vàng Li 5 N5 vin răng Bĩng Phân thùy Đng Que nâu cong cưa nht Trịn cĩ Trng Li Bng 6 N6 Gp np Cun Que vành mép phn cong phng sĩng Trng Li Bng Đng 7 N7 Trịn Bĩng nhn Trịn sa cong phng nht Trịn cĩ Trng Bng 8 N8 Bĩng Lõm Đng Que vành mép phn phng nht
Chng N1 Chng N2 Chng N3 Chng N4 Chng N5 Chng N6 Chng N7 Chng N8
Hình 3.4. Hình thái khun lc và t bào các chng vi khun sinh IAA phân lp đưc trên đt trng ngơ. Trong 23 chng vi khun đưc phân lp trên, 3 chng cĩ tc đ sinh trưng kém nên b loi b, đĩ là chng N1, P1, N8. Thí nghim tip tc nghiên cu kh năng sinh IAA ca 20 chng cịn li đ tuyn chn nhng chng vi khun cĩ kh năng sinh trưng và sinh IAA cao. 3.2. Đánh giá kh năng sinh IAA ca các chng vi khun phân lp Phm Vit Cưng (2003) đã cơng b v kh năng to IAA ca mt s chng vi khun chi Bacillus và cho thy kh năng sinh tng hp IAA ca các chng vi khun nghiên cu ph thuc rt nhiu vào chng ging, mơi trưng nuơi cy và mt s nhân t khác [4 ]. Do đĩ thí nghim tin hành xác đnh đưc hàm lưng IAA do 20 chng vi khun phân lp sinh ra trong các mơi trưng YMA khơng b sung tryptophan đ bưc đu tuyn chn các chng ging cĩ giá tr. Sau 5 ngày nuơi cy, li tâm thu dch, đo OD 530nm theo phương pháp so màu Salkowski. Nng đ IAA trong dung dch mu đưc xác đnh da vào ch s OD và phương trình đưng chun v mi tương quan gia chúng vi nhau. Ngồi ra, thí nghim s dng chng ging vi khun sinh IAA đi chiu đưc cung cp t Vin nghiên cu và phát trin Cơng ngh sinh hc – trưng Đi hc Cn Thơ là chng AM13. Kt qu đưc ghi nhn bng 3.5. và biu đ 3.1.
Kha năng sinh IAA cua cac chung vi khuân 9.000 8.000 7.000 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 Hamlương IAA (mg/l) 0.000 2 6 1 2 3 4 6 5 N N3 N4 N5 N N7 V1 V2 V3 T T T T T5 T P2 P3 P4 P P6 13 AM Chung vi khuân Biu đ 3.1: Kh năng sinh IAA ca các chng vi khun trên mơi trưng YMA. Bng 3.5: Kh năng sinh IAA ca các chng vi khun phân lp Chng Sau 5 ngày nuơi cy vi khun OD530nm Nng đ IAA (mg/l) N2 0,149 7,381 ± 0,043 k N3 0,105 4,097 ± 0,149 c N4 0,148 7,281 ± 0,050 k N5 0,113 4,719 ± 0,050 d N6 0,144 6,983 ± 0,090 j N7 0,090 2,978 ± 0,075 a V1 0,133 6,211 ± 0,090 h V2 0,139 6,634 ± 0,086 j V3 0,115 4,868 ± 0,066 de T1 0,117 4,968 ± 0,066 e T2 0,158 8,027 ± 0,066 l T3 0,120 5,192 ± 0,066 f
T4 0,146 7,157 ± 0,043 jk T5 0,164 8,525 ± 0,090 m T6 0,129 5,863 ± 0,066 g P2 0,094 3,251 ± 0,050 b P3 0,146 7,182 ± 0,066 jk P4 0,089 2,903 ± 0,043 a P5 0,146 7,157 ± 0,086 jk P6 0,106 4,147 ± 0,066 c AM13 0,120 5,192 ± 0,066 f Trong mơi trưng YMA, nng đ IAA ca các chng kho sát bin đng t 2,978 mg/l (ca chng N7) đn 8,525 mg/l (ca chng P5). Chng đi chiu AM13 cĩ kh năng sinh IAA vi nng đ 5,192 mg/l. Đi vi 6 chng vi khun phân lp trên đt vùng r trng ngơ, kh năng sinh IAA trong mơi trưng bin đng t 2,978 đn 7,381mg/l. Trong đĩ, 3 chng cĩ kh năng sinh IAA cao hơn c là N2, N4, N6; cao nht là chng N2 (7,381 mg/l). Ba chng cịn li là N3, N5, N7 cĩ kh năng sinh IAA rt thp, trong đĩ thp nht là N7. Các chng vi khun phân lp trên vùng đt và r đu cove, kh năng sinh IAA cĩ nng đ dao đng t 4,868mg/l đn 6,634mg/l, trong đĩ chng V2 đt cao nht, thp nht là chng V3. Cĩ 6 chng vi khun tuyn chn trên vùng đt và r đu tương. Kh năng sinh IAA ca các chng cĩ nng đ dao đng t 4,968mg/l đn 8,525mg/l. Trong đĩ chng T1 thp nht, chng T5 đt giá tr IAA cao nht. Đi vi 5 chng vi khun tuyn chn trên đt và r đu phng, 2 chng cĩ kh năng sinh IAA cao hơn c là P3, P5 cao nht là chng P3 (7,182 mg/l). Ba
chng cịn li là P2, P4, P6 cĩ kh năng sinh IAA rt thp, trong đĩ thp nht là P4 (2,903mg/l). Như vy, trong 4 nhĩm mu đt và r, nt sn đ phân lp vi khun sinh IAA đu thu nhn đưc mt s chng. Tuy nhiên, nhĩm các chng vi khun phân lp t đt và nt sn cây đu tương cĩ kh năng sinh IAA cao hơn c (8,525mg/l chng T5), thp nht là nhĩm vi khun sinh IAA ca đt trng ngơ (2,978mg/l chng N7). Nhìn chung, kh năng sinh IAA ca các chng phân lp ph thuc rt nhiu vào đc tính ca chng ging. Sau kt qu nghiên cu, chúng tơi chn các chng vi khun sau: N2, N4, N6, V1, V2, T2, T4, T5, T6, P3, P5 cĩ kh năng sinh IAA trên mơi trưng t 5,863mg/l đn 8,525mg/l. Tuy nhiên yu t mơi trưng khơng kém phn quan trng khi tác đng lên sinh vt nĩi chung, vi sinh vt nĩi riêng. Do đĩ thí nghim tip tc nghiên cu nh hưng ca mt s yu t như mơi trưng nuơi cy, nng đ tryptophan và thi gian nuơi cy đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn. 3.3. nh hưng ca mt s yu t đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn Sinh trưng và trao đi cht ca vi sinh vt liên quan cht ch vi các điu kin ca mơi trưng bên ngồi. Các điu kin này gm các yu t khác nhau tác đng qua li ln nhau. Đa s các yu t đĩ đu cĩ mt đc tính tác dng chung biu hin 3 đim hot đng: ti thiu, ti thích, cc đi. Vi tác dng ti thiu ca yu t mơi trưng, vi khun bt đu sinh trưng và m đu các quá trình trao đi cht. Vi tác dng ti thích, vi khun sinh trưng vi tc đ cc đi và biu hin hot tính trao đi cht, trao đi năng lưng ln nht. Vi tác dng cc đi, vi khun ngng sinh trưng và thưng cht.
nh hưng ca các yu t mơi trưng lên vi khun cĩ th thun li hoc khơng thun li. nh hưng bt li s dn đn tác dng c ch, hoc dit khun. Do tác dng c ch ca các yu t mơi trưng, t bào vi khun ngng phân chia, nu loi b yu t này khi mơi trưng, vi khun s tip tc sinh trưng và phát trin. Khi cĩ mt cht dit khun, vi khun ngng sinh trưng và cht nhanh chĩng. S cht ca t bào khơng din ra cùng lúc mà din ra dn dn. Điu đĩ th hin qua đưng cong sinh trưng ca vi khun pha suy vong, đưng cong đi xung dn dn. 3.3.1. nh hưng ca mơi trưng nuơi cy Mt vi sinh vt trong điu kin mơi trưng dinh dưng thích hp s khơng ngng hp thu cht dinh dưng và tin hành trao đi cht. Nu quá trình đng hĩa ln hơn quá trình d hĩa thì sinh khi ca vi sinh vt tăng lên. Trong quá trình đĩ, mt s sn phm trao đi cht đưc to ra, đc bit là sn phm trao đi cht th cp như IAA các chng vi khun kho sát. Đ xác đnh đưc hàm lưng IAA do vi khun sinh ra trong các mơi trưng nuơi cy, tin hành nuơi các chng vi khun tuyn chn trong mơi trưng Nfb, YEM và YMA. Sau đĩ đo OD 530nm ti thi đim 5 ngày nuơi cy. Thí nghim đưc lp li 3 ln. T phương trình đưng chun, hàm lưng IAA do các chng vi khun sinh ra đưc xác đnh bng 3.6 và biu đ 3.2. Bng 3.6: Kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn trên các mơi trưng nuơi cy Chng Nng đ IAA (mg/l) vi khun Mơi trưng Nfb Mơi trưng YEM Mơi trưng YMA N2 8,425 ± 0,086 e 8,276 ± 0,043 f 7,356 ± 0,066 e N4 4,396 ± 0,043 a 6,535 ± 0,108 c 7,306 ± 0,086 de N6 9,445 ± 0,089 f 7,803 ± 0,179 e 6,983 ± 0,090 cd
V1 7,580 ± 0,066 d 6,908 ± 0,090 c 7,107 ± 0,151 cde V2 5,838 ± 0,090 b 5,017 ± 0,090 a 6,560 ± 0,114 b T2 10,241 ± 0,066 g 6,560 ± 0,155 c 5,241 ± 0,108 a T4 6,908 ± 0,132 c 6,137 ± 0,108 b 7,231 ± 0,114 cde T5 34,794 ± 0,090 j 5,789 ± 0,090 b 8,276 ± 0,114 f T6 10,639 ± 0,108 h 8,674 ± 0,174 g 6,883 ± 0,132 bc P3 16,908 ± 0,108 i 7,729 ± 0,174 e 7,331 ± 0,132 ef P5 9,370 ± 0,139 f 7,331 ± 0,090 d 5,216 ± 0,086 a AM13 7,007 ± 0,129 j 4,993 ± 0,129 a 5,515 ± 0,114 a MT Nfb nh hưng ca mơi trưng nuơi cy đn kh năng sinh IAA MT YEM MT YMA 35,000 30,000 25,000 20,000 Hàm lưng IAA (mg/l) 15,000 10,000 5,000 0 N2 N4 N6 V1 V2 T2 T4 T5 T6 P3 P5 AM13 Chng vi khun Biu đ 3.2: nh hưng ca mơi trưng nuơi cy đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn. Kt qu cho thy các chng vi khun đưc nuơi cy trong mơi trưng Nfb cĩ kh năng sinh IAA dao đng t 4,396mg/l đn 34,794mg/l; trong đĩ chng N4, V2, T4 sinh IAA thp hơn chng đi chng AM13, 8 chng sinh IAA cao hơn chng đi chng AM13, đc bit chng T5 sinh IAA cao nht (34,794mg/l) gp gn 5 ln so vi chng AM13. Các chng vi khun nuơi cy trong mơi trưng YEM cĩ kh năng sinh IAA dao đng t 4,933mg/l đn 8,674mg/l, cĩ 5 chng sinh IAA thp hơn 7mg/l.
chng đi chng AM13, kh năng sinh IAA thp nht ( 4,933mg/l). Cĩ 6 chng sinh IAA cao hơn chng đi chng, trong đĩ chng V1 cĩ hàm lưng cao nht ( 8,674mg/l). Trong mơi trưng YMA, kh năng sinh IAA ca các chng vi khun kho sát bin đng t 5,296mg/l đn 8,276mg/l. Chng T2 sinh IAA thp nht, cao nht là chng T5. Trong các chng nuơi cy, cĩ 6 chng sinh IAA thp hơn 7mg/l, cĩ 6 chng sinh IAA ln hơn 7mg/l nhưng khơng cĩ chng nào ln hơn 9mg/l. Qua kt qu nghiên cu, các chng vi khun sinh IAA khi đưc nuơi trên mơi trưng YEM, cĩ kh năng to ra IAA cao khi đưc nuơi trên mơi trưng YMA. Hai mơi trưng này cĩ thành phn các nguyên t khống tương t nhau, ch khác bit rõ v t l ngun nưc chit nm men. Đây là ngun dinh dưng bao gm c ngun cacbon và ngun nito trong mơi trưng. mơi trưng YEM cĩ 1% cao nm men, mơi trưng YMA ch cĩ 0,5%. Như vy s chênh lch v kt qu sinh IAA ca các chng trên 2 mơi trưng là do nhu cu dinh dưng ca các chng vi khun. Các chng vi khun tuyn chn nuơi trong mơi trưng Nfb cĩ kh năng sinh IAA cao hơn nhiu so vi mơi trưng YEM và mơi trưng YMA. Mơi trưng Nfb cĩ các thành phn cơ bn cho s phát trin ca nhĩm vi khun c đnh đm và b sung thành phn các cht sinh trưng như Biotin, acid malic, thành phn vi lưng, FeEDTA đã thúc đy s phát trin ca nhĩm vi khun này, dn đn sinh IAA mnh hơn. Trên cơ s đĩ chúng tơi s dng mơi trưng Nfb đ nghiên cu s nh hưng ca nng đ tryptophan đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn. 3.3.2. nh hưng ca nng đ tryptophan Tryptophan là mt acide amin đng thi là tin cht ca IAA. S tương đng v cu trúc ca acid indol3acetic và acid amin Tryptophan là cơ s cho gi đnh auxin cĩ phi đưc tng hp t acid amin đĩ. Gi thuyt này đã đưc chng minh nh phương pháp nguyên t đánh du [7].
IAA đưc tng hp tt c các thc vt bc cao, to, nm và c vi khun. Các chng vi khun tuyn chn đu đưc phân lp trên mơi trưng cĩ Tryptophan. Tuy nhiên kh năng sinh IAA ca các chng vi khun cịn tùy thuc vào nng đ ca tin cht Tryptophan. Trên mơi trưng Nfb, nng đ tryptophan đưc kho sát là 0,5 : 1,0 : 1,5 : 2,0 mg/l đ làm cơ s tuyn chn các chng ưu th. Sau 5 ngày nuơi cy thu dch đ so màu theo phương pháp Salkowski. Kt qu đưc ghi nhn theo bng 3.7 và biu đ 3.3. Bng 3.7: Kh năng sinh IAA ca các chng vi khun các nng đ tryptophan b sung trong mơi trưng nuơi cy. Nng đ IAA (mg/l) Chng Tryptophan Tryptophan Tryptophan Tryptophan vi khun 0.5mg/l 1.0mg/l 1.5mg/l 2.0mg/l T2 2,58 ± 0,066 b 10,192 ± 0,213 f 17,281 ± 0,066 m 46,236 ± 0,050 t T5 58,376 ± 0,066 y 52,654 ± 0,066 w 40,316 ± 0,066 s 26,709 ± 0,043 n T6 14,446 ± 0,066 j 28,699 ± 0,066 o 95,689 ± 0,066 ad 80,043 ± 0,066 ac P3 15,366 ± 0,075 l 48,898 ± 0,066 u 49,719 ± 0,066 v 60,764 ± 0,066 ab P5 1,087 ± 0,066 a 56,31 ± 0,174 x 58,749 ± 0,066 z 77,306 ± 0,086 aa V1 14,371 ± 0,066 j 14,719 ± 0,025 k 31,684 ± 0,066 p 6,510 ± 0,066 d N2 9,296 ± 0,050 e 12,306 ± 0,043 g 13,749 ± 0,090 i 35,291 ± 0,075 r N6 4,221 ± 0,066 c 13,276 ± 0,043 h 34,047 ± 0,066 q 28,848 ± 0,066 o
nh hưng ca nng đ tryptophan đn kh năng sinh IAA 100 tryptophan 0.5mg/l 90 Tryptophan 80 1.0mg/l 70 Tryptophan 1.5mg/l 60 Tryptophan Hàm lưng IAA (mg/l) 50 2.0mg/l 40 30 20 10 0 T2 T5 T6 P3 P5 V1 N2 N6 Chng vi khun Biu đ 3.3: nh hưng ca nng đ tryptophan đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun. Kt qu t bng 3.7 và biu đ 3.3 cho thy chng T2 sinh IAA tăng tương ng theo dãy nng đ tryptophan t 0.5 đn 2.0mg/l và đt cao nht 46,261mg/l. Chng T5 sinh IAA cao nht ti ngưng nng đ tryptophan 0.5mg/l đt 58,251mg/l và gim dn theo ngưng nng đ tryptophan t 0.5 đn 2.0mg/l, gim xung ch cịn 26,709mg/l. Qua đĩ cho thy chng T5 khơng cĩ nhu cu cao v hàm lưng tryptophan. Vi nng đ tryptophan 0.5mg/l, chng T6 sinh IAA đt 14,446mg/l, nng đ tryptophan 1,0mg/l đt 28,699mg/l, nng đ tryptophan 1,5mg/l đt 95,689mg/l, nng đ tryptophan 2.0mg/l đt 80.043mg/l. Như vy chng T6 sinh IAA đt cao nht ti ngưng nng đ tryptophan 1,5mg/l. Chng P5 vi nng đ tryptophan 0.5mg/l sinh IAA rt thp ch đt 1,087mg/l, sau đĩ sinh IAA tăng dn theo ngưng nng đ tryptophan t 0.5 đn 2.0mg/l, đt cao nht ti ngương nng đ tryptophan 2.0mg/l đt 77,306mg/l.
Các chng T6, V1, N6 khi b sung nng đ tryptophan t 0,5 đn 1,5mg/l thì kh năng sinh IAA cũng tăng cao nhưng khi đn nng đ 2,0mg/l kh năng sinh IAA li gim xung. Chng t rng nu tha tryptophan s dn đn c ch ngưc. Qua phân tích kt qu cho thy mi chng vi khun thích hp vi 1 ngưng nng đ tryptophan nht đnh và dao đng trong khong nng đ tryptophan t 0.5 đn 2.0mg/l. Chng T5 thích hp ngưng nng đ tryptophan 0.5mg/l. Chng T6, V1, N6 thích hp ngưng nng đ tryptophan 1.5mg/l. Chng T2, P3, P5, N2 thích hp ngưng nng đ tryptophan 2.0mg/l. 3.3.3. nh hưng ca thi gian nuơi cy Thi gian sinh trưng ca các chng vi khun khác nhau do đc thù ca chng ging đã nh hưng kh năng sinh IAA theo thi gian nuơi cy. Đ thu nhn IAA t mơi trưng nuơi cy vi khun cĩ hiu qu, thí nghim tip tc kho sát s chi phi ca thi gian nuơi cy đn nng đ ca hp cht trao đi cht th cp này. Qua thí nghim nghiên cu nh hưng ca nng đ tryptophan đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun kho sát, chúng tơi tuyn chn 3 chng vi khun vi nng đ tryptophan thích hp đ tip tc đánh giá nh hưng ca thi gian nuơi cy. Chng T5 vi nng đ tryptophan 0,5 mg/l, chng T6 vi nng đ 1,5mg/l và chng P5 cĩ nng đ 2,0mg/l là các chng vi các nng đ tryptophan thích hp cĩ kh năng sinh IAA cao nht. Kt qu nghiên cu nh hưng ca thi gian nuơi cy đn kh năng IAA ca các chng vi khun tuyn chn T5, T6 và P5 đưc th hin qua bng 8 và biu đ 3.4. Thi gian kho sát t ngày th 3 đn ngày th 10. Mi ngày đu thu mu dung dch nuơi cy vi khun đ đo OD, đánh giá nng đ IAA. Bng 3.8: nh hưng ca thi gian nuơi cy đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun tuyn chn.
Nng đ IAA (mg/l) Thi gian(ngày) T5tryp 0,5 T6tryp 1,5 P5tryp 2,0 3 0,291 ± 0,075 a 1,012 ± 0,066 b 44,545 ± 0,043 n 4 28,799 ± 0,075 j 5,540 ± 0,066 d 61,734 ± 0,066 p 5 95,142 ± 0,086 w 16,137 ± 0,066 f 83,177 ± 0,066 s 6 50,988 ± 0,066 o 18,475 ± 0,066 h 86,187 ± 0,075 u 7 43,674 ± 0,066 m 24,470 ± 0,043 i 87,754 ± 0,075 v 8 37,729 ± 0,066l 16,908 ± 0,066 g 84,619 ± 0,043 t 9 29,570 ± 0,066 k 9,346 ± 0,090 e 82,555 ± 0,066 r 10 24,445 ± 0,066 i 4,843 ± 0,075 c 63,127 ± 0,075 q Trong thi gian t 3 đn 10 ngày, nng đ IAA đưc sinh ra t chng T5 bin đng t 0,291mg/l đn 95,142mg/l, nhưng cao nht vào thi đim 5 ngày nuơi cy. Chng T6 cĩ nng đ IAA to ra trong mơi trưng dao đng trong khong t 1,012mg/l đn 24,470mg/l, cao nht vào ngày th nuơi cy th 7. Lưng IAA đưc sinh ra bi chng P5 trong các ngày kho sát bin đng t 44,545mg/l đn 87,754mg/l và cao nht vào ngày th 7. Kt qu cho thy, chng T5 đt hàm lưng IAA cao nht vào ngày th 5 (95,142mg/l) và gim dn bt đu t ngày th 6. Chng T6 và chng P5 đt hàm lưng IAA cao nht vào ngày th 7 vi hàm lưng IAA ln lưt là 24,470mg/l, 87,754mg/l và gim dn t ngày th 8. Điu này mt ln na li khng đnh tính đc thù ca chng ging vi khun đã thu thp.
nh hưng kh năng sinh IAA theo thi gian 100.000 90.000 80.000 70.000 60.000 T5-tryp0.5 50.000 T6-tryp1.5 40.000 P5-tryp2.0 30.000 Hàm lưng IAA (mg/l) IAA lưng Hàm 20.000 10.000 0.000 3 ngày 4 ngày 5 ngày 6 ngày 7 ngày 8 ngày 9 ngày 10 ngày Thi gian ( ngày) Bi u đ 3.4: nh hưng ca thi gian nuơi cy ca các chng vi khun đn kh năng sinh IAA. Qua đĩ chúng tơi nhn thy thi gian nuơi cy thích hp nht đ sinh IAA cao nht ca chng T5 là 5 ngày, chng T6 và chng P5 là 7 ngày. 3.4. Kho sát nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn s ny mm và sinh trưng cây mm đu tương Hiu ng ca IAA trong cây rt đa dng. IAA điu tit quá trình sinh trưng nhng nơi (cơ quan) khác nhau. IAA cĩ vai trị điu hịa quan trng trong s kìm hãm phát trin ca chi bên, duy trì ưu th đnh [9]. IAA kích thích qu phát trin, xut phát t ht, IAA điu hịa s phát trin ca qu. IAA nh hưng đn hot tính nguyên phân. Ngồi nh hưng đn các quá trình sinh trưng, IAA cũng tác đng đn hot tính phân bào nguyên nhim trong mt s mơ, như trong tng phát sinh hoc trong nuơi cy mơ [9]. IAA gây ra s phân hĩa các t bào mch g và libe. Xut phát t khong cách xác đnh ti phía dưi ca mơ phân sinh trong cơ quan đang ln và phân hĩa tip tc hưng gc song song vi s di chuyn ca IAA. Trong mt s đon cành ct ri đưc x lý IAA thưng dn ti s hình thành r ph [9].
Chính vì cĩ nhiu nh hưng theo chiu hưng cĩ li cho cây trng nên chúng tơi nghiên cu ng dng thc t cho cây trng. Đi tưng đưc la chn kho sát là đu tương. Mc tiêu cui cùng ca đ tài là sau khi tuyn chn các chng vi khun sinh IAA cao trong nhng điu kin nuơi cy thích hp s s dng b sung trong đt trng cây h đu cũng như các loi cây thuc h khác nhm nâng cao kh năng sinh trưng ca cây trng, hn ch s dng các cht tng hp hĩa hc. Do đĩ, đ bưc đu đánh giá nh hưng ca các dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA tuyn chn đn sinh trưng ca cây trng, chúng tơi tip tc nghiên cu như sau: 3.4.1. nh hưng đn s ny mm ht đu tương Tin hành x lí ht ging đu tương trong dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA vi các nng đ khác nhau: khơng pha lỗng dung dch nuơi cy vi khun, pha lỗng 10 1, 10 2, 10 3. Nng đ IAA trong dung dch nuơi cy đưc xác đnh trưc khi x lý ht ging. Sau đĩ tin hành theo dõi v các ch tiêu: t l ny mm ca ht ging, chiu dài ca r mm, chiu cao thân mm và trng lưng khơ ca r mm. Kt qu v t l ny mm đu tương đưc th hin qua bng 3.9. Bng 3.9: nh hưng ca dung dch nuơi cy các chng vi khun tuyn chn sinh IAA đn s ny mm ca ht đu tương. Các dung dch x lý Nng đ IAA trong dd x T l ny mm(%)
ht lí ht(mg/l) Sau 24 gi Sau 48 gi 9,37 100 100 0,937 100 100 Vi khun T5 0,0937 100 100 0,00937 100 100 14,79 100 100 1,479 100 100 Vi khun T6 0,1479 97 97 0,01479 100 100 10,63 97 97 1,063 100 100 Vi khun P5 0,1063 100 100 0,01063 100 100 Nưc 0,00 90 100 T l ny mm ca ht ging đu tương đưc x lí vi dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA hu ht các nng đ khác nhau đt t l 100% cao hơn ht ging đu tương đưc x lí vi nưc. Ti thi đim 24 gi, ht đu tương sau khi ngâm nưc 10 gi ch ny mm 90%. Trong khi đĩ, các nghim thc x lý ht bng dung dch nuơi cy vi khun cĩ sinh IAA thuc các chng T5, T6. P5 đu cĩ kh năng ny mm tt hơn, bin đng t 97 – 100%. Qua đĩ cho thy dch nuơi cy vi khun sinh IAA bưc đu đã cĩ tác đng lên s ny mm ca ht. Tuy nhiên cũng cĩ nhng ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy T6 ( 0,1479mg/l) và P5 (10,63mg/l) đt 97% là do tính cht ca mt s ht ging khơng th kim sốt. 3.4.2. nh hưng đn s sinh trưng r mm đu tương Đ kho sát s nh hưng ca dung dch vi khun sinh IAA đn s sinh trưng ca r đu tương, thí nghim đưc b trí theo dõi ch tiêu chiu dài ca r
mm theo thi gian: 24 gi, 48 gi, 72 gi, 96 gi và 120 gi sau ươm ht. Kt qu đưc th hin bng 3.10. Thí nghim nghiên cu s nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn chiu dài ca r đu tương chúng tơi nhn thy lơ ht ging đưc x lí trong dch nuơi cy ca chng T5 vi các nng đ khác nhau. ti thi đim 24 gi sau ươm ht chiu dài ca r đt t 8,00 đn 9,78mm, lơ ht ging đi chng đt 11,11mm. ti thi đim 48 gi sau ươm ht chiu dài ca r đt t 13,67 đn 16,44mm, lơ ht ging đi chng đt 16,89mm. Qua kt qu trên chúng tơi nhn thy sau 48 gi ươm ht chiu dài r mm ca lơ ht ging đi chng cao hơn ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy. Nhưng t 72 gi đn 120 gi chiu dài ca lơ ht đưc x lí vi dch nuơi cy cao hơn lơ ht ging đi chng gn 1,4 ln. Lơ ht ging đưc x lí trong dch nuơi cy ca chng T6 và P5 vi các nng đ khác nhau. Do nng đ IAA dung dch nuơi cy ca chng T6 và P5 cao hơn so vi T5 nên bt đu ti thi đim 24 gi cho đn 120 gi sau ươm ht chiu dài ca r đã cĩ s khác bit rõ so vi đi chng. Điu đĩ chng t hàm lưng IAA trong dch nuơi cy tác đng đn quá trình hình thành r mm ca ht ging. Cht sinh trưng thc vt IAA th hin tác đng đa dng đn cây trng. Đc bit, IAA thúc đy s phân chia t bào nên tác đng đn vic tăng chiu dài ca r cây mm. Tuy nhiên mc đ tác đng b chi phi nhiu bi nng đ IAA trong dung dch nuơi cy vi khun cũng như đc thù ca chng ging vi sinh vt sinh IAA. Trong 3 chng kho sát, chng T5 cĩ dung dch x lý ht vi nng đ IAA thp hơn nhưng chiu dài r tương đi đng đu và khơng kém so vi nh hưng ca các chng khác. Bng 3.10: nh hưng ca dung dch nuơi cy các chng vi khun tuyn chn sinh IAA đn sinh trưng ca r mm đu tương Các Nng đ Chiu dài r mm(mm)
dung dch IAA x lý ht trong dd x lí ht(mg/l) 24 gi 48 gi 72 gi 96 gi 120 gi 9,37 9,78 16,44 37,78 67,33 93,56 Vi khun 0,937 8 16,44 46,00 14,89 94,44 T5 0,0937 9.22 14,44 39,00 57,11 81,56 0,00937 8,33 13,67 39,78 36,11 99,67 14,79 11,22 20,33 45,00 69,33 111,00 Vi khun 1,479 9,67 14,56 40,89 81,33 86,67 T6 0,1479 10,22 11,22 43,00 70,22 93,56 0,01479 5,44 15,33 48,44 86,33 99,00 10,63 7,89 17,33 37,00 71,44 77,22 Vi khun 1,063 5,56 15,22 39,00 56,00 95,67 P5 0,1063 13,11 13,89 34,11 66,22 105,60 0,01063 10 12,33 55,11 76,33 74,67 Nưc 11,11 16,89 39,56 72,44 73,56 3.4.3. nh hưng đn sinh trưng ca thân mm Khi x lý ht đu tương bng các dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA thuc 3 chng T5, T6, P5 trong 10 gi trưc khi ươm ht ny mm, thí nghim theo dõi liên tip nhng bin đng ca s ny mm, s sinh trưng ca r mm và đng thi s sinh trưng ca thân mm đu tương. Đi vi thân mm đu tương, kt qu ch đưc ghi nhn sau 48 gi, trong khi đĩ bin đng ca r mm đã đưc ghi nhn sau 24 gi.
Bng 3.11: nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đã tuyn chn đn sinh trưng ca thân mm đu tương. Nng đ Chiu dài thân mm (mm) IAA trong dd Các dung dch x lí ht x lý ht (mg/l) 24 gi 48 gi 72 gi 96 gi 120 gi 9,37 6,22 7,56 30,56 55,00 Vi khun 0,937 0 6,00 9,78 29,44 36,00 T5 0,0937 0 5,89 8,89 29,44 52,00 0,00937 0 7,00 16,78 53,11 38,56 14,79 0 6,44 5,67 25,11 24,11 Vi khun 1,479 0 6,78 10,78 27,78 31,22 T6 0,1479 0 5,22 13,89 23,33 34,00 0,01479 0 5,67 18,33 36,11 33,56 10,63 0 4,78 10,00 35,89 29,33 Vi khun 1,063 0 4,11 9,22 15,89 58,85 P5 0,1063 0 3,33 15,67 24,78 65,56 0,01063 0 4,44 23,11 46,33 51,00 Nưc 0 4,56 11,78 26,44 30,33 T kt qu thí nghim cho thy ti thi đim 48 gi sau ươm ht, lơ ht đưc x lí vi dch nuơi cy T5 vi nng đ pha lỗng 0,00937mg/l đt 7,00mm, lơ ht đi chng ch đt 4,56mm. Ti thi đim 72 gi lơ ht đưc x lí vi dch nuơi cy P5 vi nng đ 0,01063mg/l đt 23,11mm, lơ ht đi chng ch đt 11,78mm. Ti thi đim 96 gi lơ ht đưc x lí vi dch nuơi cy T5 vi nng đ 0,00937mg/l
đt 53,11mm, lơ ht đi chng ch đt 26,44mm. Ti thi đim 120 gi lơ ht đưc x lí vi dch nuơi cy P5 vi nng đ 0,1063mg/l đt 65.56mm, lơ ht đi chng ch đt 30,33mm. Qua kt qu trên cĩ th kt lun chiu dài r mm ca nhng lơ ht ging đưc đưc x lí vi dch nuơi cy các chng VK T5, T6 và P5 gim dn theo dãy nng đ IAA nhưng vn cao hơn hơn lơ ht đi chng. 3.4.4. nh hưng đn trng lưng khơ ca r đu tương S tăng trưng ca cây, ngồi ch tiêu v kích thưc cịn đưc đánh giá bng ch tiêu v trng lưng. Đ xác đnh đưc trng lưng khơ ca r mm, thí nghim đưc tin hành thu mu r sau 5 ngày ươm ht và sy khơ tuyt đi nhit đ. Kt qu đưc ghi nhn như theo bng 3.12. Bng 12: nh hưng ca dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA đn trng lưng khơ ca r đu tương sau 5 ngày ươm ht. Các dung dch Nng đ IAA trong dd Trng lưng x lý ht x lí ht (mg/l) Khơ (mg) 9,37 10,30 0,937 11,81 Vi khun T5 0,0937 12,40 0,00937 12,10 14,79 11,58 1,479 11,47 Vi khun T6 0,1479 12,32 0,01479 14,29 10,63 9,06 Vi khun P5 1,063 9,81 0,1063 12,70
0,01063 13,19 Nưc 8,51 T kt qu ca bng 12, lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng vi khun T5 theo dãy nng đ IAA pha lỗng cho kt qu dao đng t 10,30mg đn 12,10mg. Lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng vi khun T5 vi đ pha lỗng 0,0937mg/l tăng 17,5% so vi lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng T5 khơng pha lỗng. Lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng vi khun T6 theo dãy nng đ IAA pha lỗng cho kt qu bin đng t 11,47mg đn 14,29mg. Lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng vi khun T6 vi đ pha lỗng 0,01479mg/l tăng 24.5% so vi lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng T6 vi đ pha lỗng 1,063mg/l Lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy ca chng P5 cho kt qu bin đng t 9,06 đn 13,19mg. Lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng vi khun P5 vi đ pha lỗng 0,01063mg/l tăng 45,6% so vi lơ ht ging đưc x lí vi dch nuơi cy chng P5 khơng pha lỗng. S bin đng trng lưng khơ ca r mm đu tương trong dãy nng đ pha lỗng dch nuơi cy ca các chng T5, T6, và P5 cho thy nng đ x lí càng thp thì trng lưng khơ ca r càng cao. Theo chúng tơi, khi r mm đưc kích thích, chiêu dai r mm tăng nhanh nên khơng kp cho s tích lũy các tăng trưng nhanh nên khơng kp cho s tích lũy các thành phn cht khơ trong t bào. Cĩ th t l nưc trong r cao, đây chính là đc đim ca b phn hay cơ quan non so vi cơ quan già. Mt du S bin đng trng lưng khơ ca r mm đu tương trong dãy nng đ pha lỗng dch nuơi cy ca các chng T5, T6, và P5 nhưng so vi lơ ht ging
đi chng nhìn chung cĩ trng lưng khơ ca r cao hơn. Trong đĩ lơ ht đưc x lí vi dch nuơi cy T6 vi đ pha lỗng 0,01479mg/l đt cao nht (14,29mg), cao hơn 68% so vi lơ ht đi chng (8,51mg). Qua kt qu phân tích t thí nghiêm nghiên cu, theo chúng tơi nng đ IAA trong dch nuơi cy vi khun sinh IAA cĩ tác đng nh hưng đn quá trình ny mm ca ht ging đu tương trong thí nghim.
PHN IV. KT LUN VÀ KIN NGH 4.1. Kt lun Sau khi nghiên cu và thí nghim, chúng tơi kt lun như sau: 1. Đã phân lp và mơ t đc đim hình thái khun lc và t bào ca 23 chng vi khun cĩ kh năng sinh IAA ti Xã CưM’Lan, Huyn Easoup, Tnh Dăk Lăk. 2. Nng đ IAA ca các chng vi khun phân lp bin đng t 2,903 đn 8,525 mg/l khi nuơi cy trên mơi trưng YMA sau 5 ngày. Cĩ 11 chng vi khun sinh IAA đưc tuyn chn là N2, N4, N6, V1, V2, T2, T4, T5, T6, P3, P5, vi nng đ IAA t 6,211 đn 8,525 mg/l. 3. Mơi trưng nuơi cy phù hp đ các chng vi khun sinh IAA cao là Nfb so vi 2 mơi trưng YEM và YMA. 4. Khi nuơi cy trên mơi trưng Nfb cĩ b sung Tryptophan vi các nng đ 0,5mg/l; 1,0mg/l, 1,5mg/l; 2,0mg/l, mi chng vi khun thích hp vi mt nng đ tryptophan khác nhau. Chng T5 thích hp vi nng đ Tryptophan 0,5mg/l. Chng T6 thích hp vi nng đ Tryptophan 1,5mg/l. Chng P5 thích hp vi nng đ Tryptophan 2,0mg/l. 5. Thi gian nuơi cy thích hp đ các chng vi khun sinh IAA mnh nht trong mơi trưng Nfb vi nng đ tryptophan phù hp là khác nhau. Đi vi chng T5 là 5 ngày, chng T6 và P5 là 7 ngày. 6. Dung dch nuơi cy vi khun sinh IAA nh hưng đn s ny mm ca ht đu tương.
T l ny mm sau 24 gi ươm ht ca các lơ ht ging đưc x lí trong các dung dch nuơi cy các chng vi khun sinh IAA đt 100%. Lơ ht đi chng đt t l ny mm 90%. Đi vi nhng lơ ht ging đưc x lí các nng đ pha lỗng ca dch nuơi cy vi khun sinh IAA cĩ chiu dài r mm đt cao hơn so vi lơ ht đi chng. Đi vi nhng lơ ht ging đưc x lí các nng đ pha lỗng ca dch nuơi cy vi khun sinh IAA cĩ chiu dài thân mm đt cao hơn so vi lơ ht đi chng. Trng lưng khơ ca các lơ ht ging đưc x lí các nng đ pha lỗng ca dch nuơi cy vi khun sinh IAA đt cao hơn so vi lơ ht đi chng. 4.2. Kin ngh Tip tc nghiên cu đ cĩ cơ s đnh danh các chng vi khun sinh IAA đưc thu thp. Tip tc phân lp và tuyn chn các chng sinh IAA trên nt sn và đt trng đu khu vc Tây Nguyên. Tip tc nghiên cu sâu hơn v các yu t nh hưng đn kh năng sinh IAA ca các chng vi khun đ cĩ đưc điu kin nuơi cy tt nht và ng dng các chng vi khun này vào sn xut phân vi sinh chc năng.
TÀI LIU THAM KHO 1. Phm Vit Cưng, 2003, Nghiên cu tuyn chn mt s chng thuc chi Bacillus phân lp t đt trng ti Vit Nam, tp chí sinh hc, 213 217. 2. Lăng Ngc Du, 2004, Kh năng c đnh đm, hồ tan lân và sinh tng hp IAA ca vi khun Azospirillum lipoferum , tp chí sinh hc, 445 448. 3. Nguyn Anh Dũng, bài ging hĩa sinh thc vt, trưng Đi hc Tây Nguyên. 4. Nguyn Lân Dũng, Nguyn Đình Quyn, Phm Văn Ty, 1997, Vi sinh vt hc, NXB Giáo Dc, Hà Ni. 5. Nguyn Ngc Dũng, 1997, Chuyên đ c đnh Nitơ sinh hc. Trung tâm khoa hc T nhiên và Cơng ngh Quc gia, Hà Ni. 6. Đưng Hng Đt, Nguyn Lân Dũng, Nguyn Đưng, Nguyn Th Thanh Phng, Trn Th Cm Vân, Hồng Lương Vit, 1979, Vi sinh vt hc trng trt, NXB Nơng nghip. 7. Phm Bích Hiên, Phm Văn Tồn, Vin khoa hc k thut Vit Nam, Nghiên cu tuyn chn mt s chng Azotobacter đa hot tính sinh hc s dng cho sn xut phân bĩn vi sinh vt chc năng, Hi ngh Cơng ngh Sinh hc tồn quc, Hà Ni, 2003, 266270. 8. Phm Bích Hin, 2003, Nghiên cu tuyn chn mt s chng Azotobacter đa hot tính sinh hc s dng cho sn xut phân bĩn vi sinh vt chc năng, tp chí sinh hc, 266 270. 9. Nguyn Như Khanh, 1996, Sinh hc phát trin thc vt. NXB Giáo Dc Hà ni. 10 Phm Th Ngc Lan, Trương Văn Lung, Bưc đu nghiên cu vi khun Azotobacter trong đt vùng gị đi tnh Tha Thiên – Hu, Hi ngh Cơng ngh sinh hc tồn quc, Hà Ni, 1999. 406 – 411. 11. Vũ Thuý Nga, 2003, Nghiên cu kh năng sinh tng hp IAA và phân gii phosphat vơ cơ khĩ tan ca vi khun Bradyrhizobium , tp chí sinh hc, 349 352. 12. Trn Cm Vân, 2001, Vi sinh vt hc mơi trưng, Nhà xut bn quc gia Hà Ni.
13. Vũ Văn V,Sinh lý hc thc vt, NXB Giáo Dc, 2005. 14. Clark, A.G, 1974, Indol acetic production by Agrobacterium and Rhizobium species , 11(1974), 2935. 15. E. Somers, D. Ptacek, P. Gysegom, M. Srinivasan, and J. Vanderleyden. Azospirillum brasilense Produces the Auxinlike Phenylacetic Acid by Using the Key Enzyme for Indole3Acid Biosynthesis, Appied and Environmental Microbiology, Apr. 2005, p. 1803 1810. 16. Fahraeus, G. and Ljunggren, H. Preifnection phases of legume symbiosis, 1988. The ecology of Soil Bacteria, an Internation Symposium, Edit, By T. R. G. Gray and D. Parkinson, Liverpool University Press 1988, p 413414. 17. Gh. Abbas Akbari, Seyyed Mehdi Arab, H.A. Alikhani, I. Allahdadi and M.H. Arzanesh, World Journal of Agricultural Sciences 3 (4): 523529, 2007, Isolation and Selection of Indigenous Azospirillum spp . And the IAA of Superior Strains Effects on Wheat Roots. 18. Kravchenko L.V., N.M Makarova, T.S. Azarova, N.A. Provorov, I.A. Tikhonovich, (2002), Isolation and phenotypic characterization of plant growthpromoting Rhizobacteria with high antiphytopatnogenic activity and roofcoionizing ability. Microbiology, 71(4), 521525, (in Russian). 19. Krieg N.R, Doberriner J 1984, Genus Azospirillum, Tarrand, Krieg and Dobereiner 1979, 79 AC (Effective publication: Tarrand, Krieg and Dobereiner 1978). In: Krieg, N.R. (ed.) Bergeg’s manual of systematic bacteriology, vol 1. William and Winkin, Baltimore, 94104. 20. Lee M., Breckenridge C. & Knowles R., 1970, Effect of some culture conditions on the production of indole3acetic acid and a gibberellinlike substance by Azotobacter vinelandii, Can.J. Microbiol.,16: 1225 – 1330. 21. Rajendra – Prasad et al, 1990, Nutrient management and supply system for sustaining agriculture in 1990, Nitrogen management, Soil fertility and feritilizer use Vol IV, Edited by Virendra Kumar. Shotriya G. C. Kaore S. V, 41 51. 22. R. Beltra, G. Fraile, F. Diaz, 1985, The Fomation Growth Substances by Rhizobium Species, p 617622.
23. Sisir Ghoh, P.S. Basu, 2006, Production and metabolism of indole acetic acid in roots and root nodules of Phaseolus mungo, Research 161, 362 366. 24. Subba Rao N.S., 1980, Azotobacter inoculant. in: Biofertilizers in Agricultures, 2nd edition, Oxford & IBH. 25. Sutthinan khamna, Akira Yokota, John F. Peberdy, Saisamorn Lumyong, 2010, Indole3acetic acid production by Streptomyces sp. isolated from some Thai medicinal plan rhizosphere soils , EurAsia J BioSci 4, 2332. 26. Y. Bashan, G. Holgui, 1997. Azospirillum plat relationships: environmental and physiological advances (1990 – 1996). Can. J. Microbiol, 43 (1997), 103 – 121. 27. Y. Bashan, & Levanony, H. 1990. Current status of Azospirillum inoculation technology: Azospirillum as a challenge for agriculture. Can. J. Microbiol. 36:591608. 28. Dobereiner, J., 1983. Ten years Azospirillum , En W. Klingmuller (Ed.), Azospirillum II: Genetics, physiology and ecology. Birkhauser, Basel Swizerland. (Experientia suplementum, 48), pp:923.
PHN PH LC Ph lc 1a Xây dng phương trình đưng chun v mi tương quan gia ch s OD 530nm và nng đ IAA. ng nghim s 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Nng đ 0 100 50 40 30 25 20 15 10 5 IAA (mg/l) IAA 200mg/l(ml 1 0,3 0,25 0 0,5 0,4 0,2 0,15 0,1 0,05 ) Dung dch đm (ml) 2 1 1,5 1,6 1,7 1,75 1,8 1,85 1,9 1,95 Tng th tích (ml) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 Thuc th Salkowski 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 (ml) OD 530nm 0.00 1.31 0.78 0.63 0.56 0.42 0.28 0.27 0.13 0.05 0 7 2 3 0 8 5 2 3 9 Đưng chun tương quan gia OD530 vi hàm lưng IAA 120 100 y = 0.0134x + 0.0501 80 R2 = 0.9755 60 40 OD530nm 20 0 20 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 Nng đ IAA (mg/l)
Biu đ 1. Phương trình đưng chun v mi tương quan gia ch s OD 530nm và nng đ IAA. Phương trình đưng chun là: y = 0.0134x + 0.0501. Ph lc 2a Đánh giá kh năng sinh IAA ca các chng vi khun phân lp tren mơi trưng YMA Nng đ IAA Chng VK OD530nm (5 ngày) OD530nm TB (mg/l) N2 0.150 0.149 0.148 0.149 7.381 N3 0.137 0.141 0.137 0.138 6.585 N4 0.147 0.149 0.147 0.148 7.281 N5 0.114 0.112 0.114 0.113 4.719 N6 0.142 0.143 0.146 0.144 6.983 N7 0.092 0.089 0.089 0.090 2.978 V1 0.131 0.134 0.135 0.133 6.211 V2 0.137 0.141 0.139 0.139 6.634 V3 0.117 0.115 0.114 0.115 4.868 T1 0.115 0.117 0.118 0.117 4.968 T2 0.158 0.159 0.156 0.158 8.027 T3 0.118 0.120 0.121 0.120 5.192 T4 0.145 0.146 0.147 0.146 7.157 T5 0.162 0.165 0.166 0.164 8.525 T6 0.129 0.127 0.130 0.129 5.863 P2 0.093 0.093 0.095 0.094 3.251 P3 0.146 0.148 0.145 0.146 7.182 P4 0.089 0.088 0.090 0.089 2.903 P5 0.148 0.144 0.146 0.146 7.157 P6 0.106 0.107 0.104 0.106 4.147 AM13 0.120 0.118 0.121 0.120 5.192
Ph lc 3a nh hưng ca mơi trưng nuơi cy Sau 5 ngày nuơi cy trên mơi trưng Nfb Chng VK Nng đ OD530n.m OD530 trung bình IAA (mg/l ) N2 0.165 0.163 0.161 0.163 8.425 N4 0.108 0.110 0.109 0.109 4.396 N6 0.176 0.179 0.175 0.177 9.445 V1 0.153 0.150 0.152 0.152 7.580 V2 0.129 0.126 0.130 0.128 5.838 T2 0.186 0.189 0.187 0.187 10.241 T4 0.140 0.142 0.146 0.143 6.908 T5 0.514 0.517 0.518 0.516 34.794 T6 0.195 0.190 0.193 0.193 10.639 P3 0.279 0.274 0.277 0.277 16.908 P5 0.178 0.172 0.177 0.176 9.371 AM13 0.141 0.144 0.147 0.144 7.007 nh hưng ca mơi trưng nuơi cy Sau 5 ngày nuơi cy trên mơi trưng YEM Chng VK Nng đ OD530n.m OD530 trung bình IAA (mg/l) N2 0.162 0.160 0.161 0.161 8.276 N4 0.140 0.135 0.138 0.138 6.535 N6 0.156 0.158 0.150 0.155 7.803 V1 0.145 0.142 0.141 0.143 6.908 V2 0.118 0.119 0.115 0.117 5.017 T2 0.142 0.137 0.135 0.138 6.560 T4 0.135 0.132 0.130 0.132 6.137 T5 0.127 0.130 0.126 0.128 5.789 T6 0.162 0.167 0.170 0.166 8.674 P3 0.158 0.150 0.153 0.154 7.729 P5 0.150 0.146 0.149 0.148 7.331 AM13 0.120 0.117 0.114 0.117 4.993 nh hưng ca mơi trưng nuơi cy Sau 5 ngày nuơi cy trên mơi trưng YMA Nng đ Chng VK OD530n.m OD530 trung bình IAA (mg/l) N2 0.150 0.147 0.149 0.149 7.356 N4 0.148 0.150 0.146 0.148 7.306 N6 0.142 0.143 0.146 0.144 6.983 V1 0.142 0.149 0.145 0.145 7.107 V2 0.140 0.135 0.139 0.138 6.560 T2 0.118 0.120 0.123 0.120 5.241 T4 0.145 0.146 0.150 0.147 7.231
T5 0.164 0.160 0.159 0.161 8.276 T6 0.143 0.139 0.145 0.142 6.883 P3 0.149 0.151 0.145 0.148 7.331 P5 0.118 0.120 0.122 0.120 5.216 AM13 0.126 0.121 0.125 0.124 5.515 Ph lc 4a nh hưng ca nng đ tryptophan OD530n.m Chng Nng đ OD530nm Nng đ VK tryptophan (mg/l) TB IAA(mg/l) 0.5 0.086 0.085 0.083 0.085 2.580 T2 1 0.190 0.189 0.901 0.427 28.102 1.5 0.282 0.280 0.283 0.282 17.281 2 0.671 0.669 0.669 0.670 46.236 0.5 0.832 0.831 0.834 0.832 58.376 T5 1 0.754 0.756 0.757 0.756 52.654 1.5 0.592 0.589 0.590 0.590 40.316 2 0.409 0.407 0.408 0.408 26.709 0.242 0.245 0.244 0.244 0.5 14.445 T6 1 0.435 0.436 0.433 0.435 28.699 1.5 1.332 1.331 1.334 1.332 95.689 2 1.121 1.124 1.123 1.123 80.042 0.5 0.258 0.255 0.255 0.256 15.366 P3 1 0.705 0.707 0.704 0.705 48.898 1.5 0.716 0.718 0.715 0.716 49.719 2 0.863 0.866 0.864 0.864 60.764 0.5 0.025 0.023 0.026 0.025 1.898 P5 1 0.801 0.804 0.809 0.805 56.311 1.5 0.837 0.839 0.836 0.837 58.749 2 1.088 1.086 1.084 1.086 77.306 0.5 0.243 0.241 0.244 0.243 14.371 V1 1 0.248 0.247 0.247 0.247 14.719 1.5 0.476 0.473 0.475 0.475 31.684 2 0.136 0.139 0.137 0.137 6.510 0.5 0.176 0.174 0.174 0.175 9.296 N2 1 0.215 0.216 0.214 0.215 12.306 1.5 0.232 0.235 0.236 0.234 13.749 2 0.524 0.524 0.521 0.523 35.291 0.5 0.108 0.105 0.107 0.107 4.221 1 0.227 0.229 0.228 0.228 13.276
N6 1.5 0.505 0.508 0.506 0.506 34.047 0.435 0.438 0.437 0.437 2 28.848 Ph lc 5a nh hưng thi gian nuơi cy Nng đ Thi CHNG Nng đ gian OD530nm IAA VK tryp(mg/l) (ngày) OD530n.m TB (mg/l) 3 0.052 0.055 0.055 0.054 0.291 4 0.438 0.435 0.435 0.436 28.799 5 1.325 1.323 1.327 1.325 95.142 6 0.733 0.732 0.735 0.733 50.988 T5 0.5 7 0.635 0.634 0.637 0.635 43.674 8 0.556 0.554 0.557 0.556 37.729 9 0.446 0.448 0.445 0.446 29.570 10 0.379 0.378 0.376 0.378 24.445 3 0.062 0.064 0.065 0.064 1.012 4 0.123 0.124 0.126 0.124 5.540 5 0.266 0.268 0.265 0.266 16.137 6 0.298 0.299 0.296 0.298 18.475 T6 1.5 7 0.378 0.377 0.379 0.378 24.470 8 0.275 0.278 0.277 0.277 16.908 9 0.173 0.176 0.177 0.175 9.346 10 0.113 0.116 0.116 0.115 4.843 3 0.646 0.647 0.648 0.647 44.545 4 0.877 0.876 0.879 0.877 61.734 5 1.166 1.163 1.165 1.165 83.177 6 1.206 1.203 1.206 1.205 86.187 P5 2 7 1.225 1.225 1.228 1.226 87.754 8 1.184 1.185 1.183 1.184 84.619 9 1.158 1.156 1.155 1.156 82.555 10 0.897 0.894 0.897 0.896 63.127
Ph lc 6a CH TIÊU THEO DÕI SAU 24 GI Chng VK Nng đ IAA T l ny mm (%) Chiu dài r mm (mm) trong dd pha lỗng L1 L2 L3 TB L1 L2 L3 TB TBC 4 3 12 6.30 9.37 100 100 100 100 10 9 7 8.70 9.78 9 9 12 10.00 12 18 0 10.00 0.937 100 100 100 100 10 5 8 7.70 8 T5 9 10 0 6.30 14 11 6 10.30 0.0937 100 100 100 100 2 16 2 6.70 9.22 6 12 14 10.70 5 9 13 9.00 0.00937 100 100 100 100 12 4 18 11.30 8.83 6 14 7 9.00 12 13 16 13.70 14.79 100 100 100 100 0 14 3 5.70 11.22 16 12 15 14.30 12 13 11 12.00 1.479 100 100 100 100 12 5 10 9.00 9.67 T6 7 3 14 8.00 12 11 15 12.70 0.1479 100 100 90 97 10 14 12 12.00 10.22 5 8 5 6.00 7 2 3 4.00 0.001479 100 100 100 100 14 3 10 9.00 5.44 2 4 4 3.30 10 1 9 6.70 P5 10.63 100 100 90 97 9 6 13 9.30 7.89 1 10 12 7.70
9 11 8 9.30 1.063 100 100 100 100 2 5 2 3.00 5.56 6 3 4 4.30 10 1 15 8.70 0.1063 100 100 100 100 20 14 15 16.30 13.11 18 15 10 14.30 11 10 3 8.00 0.01063 100 100 100 100 12 2 12 8.70 10 15 14 11 13.30 14 16 15 15.00 Nưc 80 90 100 90 9 8 23 13.30 11.11 13 0 2 5.00
Ph luc 7a CH TIÊU THEO DÕI VÀO THI ĐIM 48 GI SAU ƯƠM HT Chng Nng đ Chiu dài r mm (mm) Chiu cao thân mm(mm) T l VK IAA ny trong mm dd pha (%) lỗng L1 L2 L1 L2 L1 L2 L1 L2 L1 L2 25 19 25 19 25 19 25 19 25 19 9.37 100 15 14 15 14 15 14 15 14 15 14 18 22 18 22 18 22 18 22 18 22 25 10 25 10 25 10 25 10 25 10 0.937 100 20 8 20 8 20 8 20 8 20 8 T5 15 20 15 20 15 20 15 20 15 20 20 16 20 16 20 16 20 16 20 16 0.0937 100 21 10 21 10 21 10 21 10 21 10 12 15 12 15 12 15 12 15 12 15 18 10 18 10 18 10 18 10 18 10 0.00937 100 12 15 12 15 12 15 12 15 12 15 18 12 18 12 18 12 18 12 18 12 30 22 30 22 30 22 30 22 30 22 14.79 100 14 17 14 17 14 17 14 17 14 17 15 20 15 20 15 20 15 20 15 20 18 10 18 10 18 10 18 10 18 10 1.479 100 35 15 35 15 35 15 35 15 35 15 T6 12 10 12 10 12 10 12 10 12 10 15 14 15 14 15 14 15 14 15 14 0.1479 97 6 11 6 11 6 11 6 11 6 11 12 10 12 10 12 10 12 10 12 10 18 12 18 12 18 12 18 12 18 12 0.001479 100 8 18 8 18 8 18 8 18 8 18 15 20 15 20 15 20 15 20 15 20 18 26 18 26 18 26 18 26 18 26 10.63 97 20 12 20 12 20 12 20 12 20 12 25 14 25 14 25 14 25 14 25 14 1.063 100 24 17 24 17 24 17 24 17 24 17
11 8 11 8 11 8 11 8 11 8 P5 14 12 14 12 14 12 14 12 14 12 6 11 6 11 6 11 6 11 6 11 0.1063 100 18 16 18 16 18 16 18 16 18 16 10 8 10 8 10 8 10 8 10 8 12 17 12 17 12 17 12 17 12 17 0.01063 100 16 20 16 20 16 20 16 20 16 20 13 13 13 13 13 13 13 13 13 13 14 10 14 10 14 10 14 10 14 10 Nưc 100 20 15 20 15 20 15 20 15 20 15 18 10 18 10 18 10 18 10 18 10
Ph lc 8a CH TIÊU THEO DÕI VÀO THI ĐIM 72 GI SAU ƯƠM HT IAA ca dd nuơi Chiu dài r mm Chiu dài thân mm cy VK Cơng thc pha lỗng L1 L2 L3 TB TBC L1 L2 L3 TB TBC 55 50 44 49.700 30 5 7 14.000 9.37 25 30 32 29.000 37.780 6 5 4 5.000 7.560 32 45 27 34.700 5 3 3 3.700 70 55 51 58.700 50 16 17 27.700 0.937 30 28 33 30.300 46.000 15 5 22 14.000 9.78 T5 45 60 42 49.000 15 5 6 8.700 80 40 46 55.300 25 3 5 11.000 0.0937 25 32 27 28.000 39.000 4 2 16 7.300 8.890 20 30 51 33.700 10 3 12 8.300 16.780 25 58 23 35.300 13 10 12 11.700 0.00937 60 25 45 43.300 39.780 20 5 6 10.300 60 30 32 40.700 10 5 7 7.300 62 60 25 49.000 7 5 6 6.000 14.79 60 20 39 39.700 45.000 6 5 5 5.300 5.670 45 32 62 46.300 6 4 7 5.700 58 20 41 39.700 13 1 16 10.000 1.479 35 32 37 34.700 40.890 10 3 12 8.300 10.780 T6 42 60 43 48.300 20 15 7 14.000 70 45 66 60.300 30 6 5 13.700 0.1479 35 30 40 35.000 43.000 20 13 8 13.700 13.890 35 32 34 33.700 15 11 17 14.300 71 30 65 55.300 29 12 15 18.700 0.001479 75 10 35 40.000 48.440 26 3 17 15.300 18.330 50 60 40 50.000 27 25 11 21.000
64 10 20 31.300 20 3 5 9.300 10.63 58 45 25 42.700 37.000 18 16 7 13.700 10.000 30 44 37 37.000 5 4 12 7.000 P5 50 60 34 48.000 15 11 5 10.300 1.063 15 25 45 28.300 39.000 10 15 6 10.300 9.220 35 54 33 40.700 5 7 9 7.000 30 40 27 32.300 50 10 13 24.300 0.1063 50 42 35 42.300 34.110 12 20 16 16.000 15.670 30 33 20 27.700 5 7 8 6.700 70 67 54 63.700 40 42 13 31.700 0.01063 65 63 46 58.000 55.110 25 23 17 21.700 23.110 64 32 35 43.700 14 14 20 16.000 38 30 46 38.000 22 4 6 10.700 Nưc 49 41 28 39.300 39.560 24 6 7 12.300 11.780 55 34 35 41.300 12 5 20 12.300 Ph lc 9a CH TIÊU THEO DÕI VÀO THI ĐIM 96 GI SAU ƯƠM HT Chng Nng đ IAA Chiu dài r mm(cm) Chiu cao thân mm(cm) VK trong dd pha lỗng L1 L2 L3 TB TBC L1 L2 L3 TB TBC 105 72 25 67.333 55 44 21 40.000 9.37 68 51 110 76.333 67.333 20 17 41 26.000 30.556 60 46 69 58.333 25 32 20 25.667 71 71 75 75.667 51 15 20 28.667 0.937 78 72 70 73.333 74.889 24 25 18 22.333 29.444 T5 72 75 70 75.667 41 35 36 37.333 80 49 51 60.000 51 15 20 28.667 0.0937 79 12 17 36.000 57.111 24 25 18 22.333 29.444 92 82 52 75.333 41 35 36 37.333 42 45 18 35.000 22 85 37 48.000 0.00937 35 36 64 45.000 36.111 60 41 67 56.000 63.111 10 20 55 28.333 105 65 86 85.333 75 60 43 59.333 21 10 32 21.000 14.79 70 72 81 74.333 69.333 35 25 28 29.333 25.111 T6 80 66 77 74.333 26 30 19 25.000 116 32 76 74.667 38 6 8 17.333 1.479 81.333 27.778 115 110 81 102.000 51 27 50 42.667
112 55 35 67.333 33 80 32 48.333 80 80 57 72.333 20 10 42 24.000 0.1479 30 110 78 72.667 70.222 6 10 53 23.000 23.333 40 65 92 65.667 16 15 38 23.000 65 55 67 62.333 37 36 35 36.667 0.001479 120 100 81 100.333 86.333 12 10 55 36.667 36.111 100 95 94 96.333 32 24 39 35.012 95 90 75 86.667 8 9 38 18.333 10.63 60 67 74 67.000 71.444 60 55 27 47.333 35.889 80 82 20 60.667 40 42 44 42.000 105 30 55 63.333 25 27 14 22.000 1.063 45 75 27 49.000 56.000 5 9 23 12.333 15.889 P5(x = 20 65 82 55.667 10 18 12 13.333 10.63mg/l) 105 70 95 90.000 60 20 40 40.000 0.1063 40 65 55 53.333 66.222 15 12 28 18.333 24.778 65 67 34 55.333 15 16 17 16.000 116 105 52 91.000 80 61 28 56.333 0.01063 110 47 71 76.000 76.333 40 37 19 32.000 46.333 50 66 70 62.000 35 52 65 50.667 78 77 54 69.667 46 36 32 38.000 Nưc 9.37 65 65 78 69.333 72.444 10 23 17 16.667 26.444 70 73 92 78.333 25 28 21 24.667 Ph lc 10a Ch tiêu theo dõi v chiu dài r mm và thân mm vào thi đim 120 gi sau ươm ht Chng VK Nng đ Chiu dài r mm(mm) Chiu cao thân mm(mm) IAA trong dd pha lỗng L1 L2 L3 TB TBC L1 L2 L3 TB TBC 140 110 92 114.0 50 45 43 46.0 9.37 80 90 64 78.0 93.56 80 46 51 59.0 55.0 100 87 79 88.7 82 32 66 60.0 T5 110 65 104 93.0 75 14 31 40.0 0.937 120 120 81 107.0 94.44 65 10 23 32.7 36.0 70 87 93 83.3 15 55 36 35.3 50 110 66 75.3 40 80 65 61.7 0.0937 81.56 52.0 95 75 98 89.3 55 30 27 37.3
85 45 110 80.0 90 12 69 57.0 85 140 105 110.0 40 45 36 40.3 0.00937 95 140 77 104.0 99.67 25 15 72 37.3 38.56 75 70 110 85.0 10 35 69 38.0 120 80 115 111.7 40 15 17 24.0 14.79 115 120 96 114.3 111.0 30 20 23 24.3 24.11 95 98 105 105.0 31 10 31 24.0 95 86 47 76.0 65 6 44 38.3 1.479 125 76 66 89.0 86.67 85 9 35 43.0 31.22 T6 85 90 110 95.0 15 12 10 12.3 130 30 110 90.0 35 15 36 28.7 0.1479 75 111 99 95.0 93.56 20 40 17 25.7 34.0 135 85 67 95.7 55 41 47 47.7 105 80 102 105.7 55 28 44 42.3 0.001479 80 110 87 89.3 99.00 31 32 31 31.3 33.56 113 118 125 115.0 25 30 26 27.0 80 55 78 71.0 60 15 35 36.7 10.63 75 56 58 63.0 77.22 40 20 21 27.0 29.33 120 100 73 97.7 25 15 33 24.3 130 140 132 134.0 110 70 55 78.3 1.063 120 25 78 74.3 95.67 100 15 42 52.3 58.89 85 55 96 78.7 35 37 66 46.0 P5 90 140 90 106.7 55 40 74 56.3 0.1063 140 120 110 123.3 105.56 82 67 76 75.0 65.56 88 97 75 86.7 110 53 33 65.3 60 20 73 51.0 80 20 55 51.7 0.01063 130 65 66 87.0 74.67 50 36 43 43.0 51.0 120 88 50 86.0 70 45 60 58.3 85 55 75 75.0 35 33 4 24.0 Nưc 9.37 55 77 67 69.7 73.56 6 6 17 9.7 16.33 45 120 63 76.0 34 3 9 15.3
Ph luc 11a Ch tiêu theo dõi v trng lưng r vào thi đim 120 gi sau ươm ht IAA ca dd nuơi cy Cơng VK thc pha lỗng Trng lưng r tươi(mg) Trng lưng r khơ(mg) L1 L2 L3 TB TBC L1 L2 L3 TB TBC 75.1 92.7 112.1 93.3 9.3 7 10.5 8.9 9.37 96.7 88.3 105.4 96.8 90.84 11.7 6.2 12.5 10.1 10.30 87.2 76.9 83.2 82.4 13.4 8.7 13.4 11.8 80.6 115.6 95.7 97.3 9.6 17.1 10.3 12.3 0.937 85.7 110.3 101.1 99.0 87.23 8.7 19.4 9.4 12.5 11.81 T5 74.6 99.1 22.4 65.4 9.9 13.7 8.2 10.6 61.7 96.6 19.5 59.3 12.4 7.6 13.5 11.2 0.0937 65.4 75.1 17.2 52.6 68.04 13.5 9.5 15.3 12.8 12.40 97.5 86.3 93.1 92.3 13.9 11.3 14.6 13.3 65.4 85.3 91.8 80.8 7.9 11.3 17.1 12.1 0.00937 89.3 67.2 131.1 95.9 86.93 8 10.3 18.5 12.3 12.1 91.2 50.1 111 84.1 8.3 8.4 19.1 11.9 T6 14.79 97.3 105.2 83.2 95.2 94.53 8.3 11.4 13.3 11.0 11.58
103.1 120.4 67.4 97.0 10.2 12.3 12.9 11.8 86.6 99.3 88.3 91.4 12.1 13.3 10.4 11.9 95.6 82.1 99.2 92.3 9.7 10.8 10.5 10.3 1.479 119.4 79.2 110.3 103.0 97.28 10.5 11.8 12.5 11.6 11.47 120.3 65.4 104 96.6 11.4 11.3 14.7 12.5 69.3 105.4 83.6 86.1 12.3 13.4 8.8 11.5 0.1479 87.3 135.9 110.2 111.1 103.04 10.7 19.3 6.3 12.1 12.32 93.7 120.2 121.8 111.9 8.1 21.1 10.9 13.4 115.3 115.4 93.7 108.1 7.7 16.5 14.1 12.8 0.001479 124.4 107.9 69.1 100.5 97.86 8 17.5 17.2 14.2 14.29 97.3 87.2 70.4 85.0 9.2 19.1 19.3 15.9 69.3 103.4 81.3 84.7 13.3 10.6 10.4 11.4 10.63 76.6 105 82.4 88.0 89.49 15 12.6 13.7 13.8 12.7 82.1 111.5 93.8 95.8 16.1 13.9 8.7 12.9 96.3 87.6 99.1 94.3 9.2 16.2 9.9 11.8 1.063 113.1 107.8 111.2 110.7 106.51 8.5 12.1 9.6 10.1 9.81 121.1 95.9 126.5 114.5 7.6 8.3 6.9 7.6 P5 93.3 125.3 92.3 103.6 9 7.8 7.3 8.0 0.1063 84.9 149.2 96.7 110.3 109.07 7.3 9.4 8.4 8.4 9.06 101.2 105.4 133.3 113.3 10 10.7 11.6 10.8 127.6 140.4 143.5 137.2 14.4 12.4 14.7 13.8 0.01063 110 10.6 131.1 83.9 112 12.8 14.4 17.1 14.8 13.19 122.1 111.7 111 114.9 9.1 11.1 12.7 11.0 70.4 74.4 55.1 66.6 10.5 8.3 6.7 8.5 Nưc 9.37 56.1 56.3 42.5 51.6 58.70 6.8 7.8 5.3 6.6 8.51 68.4 31.6 73.5 57.8 9.4 9 12.8 10.4
Đt + nt sn đu tương Đt + nt sn đu phng Ph lc 12b: Hình phân lp và ng ging ca các chng vi khun đưc phân lp Đt + nt sn đu ve Đt trng ngơ
Chng T1 T6 Chng V1 V3 Chng N1 – N8 Chng P1 – P6 Chng T1 Chng T2 Chng T3 Ph lc 13b: Hình cy ria thu dịng thun các chng vi khun phân lp Chng T4 Chng T5 Chng T6 Chng P1 Chng P2 Chng P3 Chng P4 Chng P5 Chng P6
Chng V1 Chng V2 Chng V3 Chng N1 Chng N2 Chng N3 Chng N4 Chng N5 Chng N6 Chng N7 Chng N8
S liu x lí thng kê trên phn mm SPSS 16.0 Descriptives Sau 5 ngày trên YMA 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum N2 3 7.38052 .074515 .043021 7.19542 7.56563 7.306 7.455 N3 3 4.09701 .258515 .149254 3.45483 4.73920 3.799 4.246 N4 3 7.28109 .086172 .049751 7.06703 7.49516 7.231 7.381 N5 3 4.71891 .086172 .049751 4.50484 4.93297 4.619 4.769 N6 3 6.98259 .155348 .089690 6.59668 7.36849 6.858 7.157 N7 3 2.97761 .129258 .074627 2.65652 3.29871 2.903 3.127 V1 3 6.21144 .155348 .089690 5.82554 6.59735 6.037 6.336 V2 3 6.63433 .149254 .086172 6.26356 7.00510 6.485 6.784 V3 3 4.86816 .113994 .065815 4.58498 5.15134 4.769 4.993 T1 3 4.96766 .113994 .065815 4.68448 5.25084 4.843 5.067 T2 3 8.02736 .113994 .065815 7.74419 8.31054 7.903 8.127 T3 3 5.19154 .113994 .065815 4.90836 5.47472 5.067 5.291 T4 3 7.15672 .074627 .043086 6.97133 7.34210 7.082 7.231 T5 3 8.52488 .155348 .089690 8.13897 8.91078 8.351 8.649 T6 3 5.86318 .113994 .065815 5.58001 6.14636 5.739 5.963 P2 3 3.25124 .086172 .049751 3.03718 3.46531 3.201 3.351 P3 3 7.18159 .113994 .065815 6.89841 7.46477 7.082 7.306 P4 3 2.90299 .074627 .043086 2.71760 3.08837 2.828 2.978 P5 3 7.15672 .149254 .086172 6.78595 7.52748 7.007 7.306 P6 3 4.14677 .113994 .065815 3.86359 4.42994 4.022 4.246 AM13 3 5.19154 .113994 .065815 4.90836 5.47472 5.067 5.291 Total 63 5.74828 1.661718 .209357 5.32978 6.16678 2.828 8.649 ANOVA Sau 5 ngày trên YMA Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups (Combined) 170.514 20 8.526 521.351 .000 Linear Term Contrast 2.153 1 2.153 131.648 .000 Deviation 168.361 19 8.861 541.861 .000 Within Groups .687 42 .016
ANOVA Sau 5 ngày trên YMA Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups (Combined) 170.514 20 8.526 521.351 .000 Linear Term Contrast 2.153 1 2.153 131.648 .000 Deviation 168.361 19 8.861 541.861 .000 Within Groups .687 42 .016 Total 171.201 62 Sau 5 ngày trên YMA Ngh Subset for alpha = 0.05 iem thuc N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Dun P4 3 2.90299 can a N7 3 2.97761 P2 3 3.25124 N3 3 4.09701 P6 3 4.14677 N5 3 4.71891 V3 3 4.86816 4.86816 T1 3 4.96766 T3 3 5.19154 AM 3 5.19154 13 T6 3 5.86318 V1 3 6.21144 V2 3 6.63433 N6 3 6.98259 P5 3 7.15672 7.15672 T4 3 7.15672 7.15672 P3 3 7.18159 7.18159 N4 3 7.28109
N2 3 7.38052 T2 3 8.02736 T5 3 8.52488 Sig. .479 1.000 .636 .160 .346 1.000 1.000 1.000 1.000 .088 .061 1.000 1.000
Descriptives Sau 5 ngày trên YMA 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Lower Upper N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum N2 3 7.35565 .113897 .065758 7.07271 7.63858 7.231 7.455 N4 3 7.30597 .149254 .086172 6.93520 7.67674 7.157 7.455 N6 3 6.98259 .155348 .089690 6.59668 7.36849 6.858 7.157 V1 3 7.10697 .262081 .151313 6.45592 7.75801 6.858 7.381 V2 3 6.55970 .197444 .113994 6.06922 7.05018 6.336 6.709 T2 3 5.24129 .187807 .108430 4.77476 5.70783 5.067 5.440 T4 3 7.23134 .197444 .113994 6.74086 7.72182 7.082 7.455 T5 3 8.27612 .197444 .113994 7.78564 8.76660 8.127 8.500 T6 3 6.88308 .227989 .131629 6.31673 7.44944 6.634 7.082 P3 3 7.33085 .227989 .131629 6.76449 7.89720 7.082 7.530 P5 3 5.21642 .149254 .086172 4.84565 5.58718 5.067 5.366 AM13 3 5.51493 .197444 .113994 5.02445 6.00540 5.291 5.664 Total 36 6.75041 .937776 .156296 6.43311 7.06771 5.067 8.500 ANOVA Sau 5 ngày trên YMA Sum of Mean Squares df Square F Sig. Between (Combined) 29.889 11 2.717 73.188 .000 Groups Linear Contrast 4.910 1 4.910 132.246 .000 Term Deviation 24.979 10 2.498 67.282 .000 Within Groups .891 24 .037 Total 30.780 35
Homogeneous Subsets Sau 5 ngày trên YMA Nghiem Subset for alpha = 0.05 thuc N 1 2 3 4 5 6 Duncan a P5 3 5.21642 T2 3 5.24129 AM13 3 5.51493 V2 3 6.55970 T6 3 6.88308 6.88308 N6 3 6.98259 6.98259 V1 3 7.10697 7.10697 7.10697 T4 3 7.23134 7.23134 7.23134 N4 3 7.30597 7.30597 P3 3 7.33085 7.33085 N2 3 7.35565 T5 3 8.27612 Sig. .084 .051 .052 .057 .169 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
Descriptives Sau 5 ngày trên Nfb 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Lower Upper N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum N2 3 8.42533 .149500 .086314 8.05395 8.79671 8.276 8.575 N4 3 4.39567 .074501 .043013 4.21060 4.58074 4.321 4.470 N6 3 9.44533 .155004 .089492 9.06028 9.83039 9.321 9.619 V1 3 7.57933 .114019 .065829 7.29609 7.86257 7.455 7.679 V2 3 5.83833 .155565 .089815 5.45189 6.22478 5.664 5.963 T2 3 1.02413E1 .114129 .065892 9.95782 10.52484 10.142 10.366 T4 3 6.90800 .228147 .131721 6.34125 7.47475 6.709 7.157 T5 3 3.47933E1 .155565 .089815 34.40689 35.17978 34.619 34.918 T6 3 1.06390E1 .187752 .108399 10.17260 11.10540 10.440 10.813 P3 3 1.69080E1 .187752 .108399 16.44160 17.37440 16.709 17.082 P5 3 9.37067 .239951 .138536 8.77460 9.96674 9.097 9.545 AM13 3 7.00733 .223500 .129038 6.45213 7.56254 6.784 7.231 Total 36 1.09626E1 7.901002 1.316834 8.28932 13.63595 4.321 34.918 ANOVA Sau 5 ngày trên Nfb Sum of Mean Squares df Square F Sig. Between (Combined) 2184.191 11 198.563 6.685E3 .000 Groups Linear Contrast 170.394 1 170.394 5.737E3 .000 Term Deviation 2013.797 10 201.380 6.780E3 .000 Within Groups .713 24 .030 Total 2184.904 35
Descriptives Sau 5 ngày trên YEM Sau 5 ngày trên Nfb Nghiem Subset for alpha = 0.05 thuc N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Dun N4 3 4.39567 can a V2 3 5.83833 T4 3 6.90800 AM13 3 7.00733 V1 3 7.57933 N2 3 8.42533 P5 3 9.37067 N6 3 9.44533 T2 1.02413 3 E1 T6 1.06390E 3 1 P3 1.69080E 3 1 T5 3 3.47933E1 Sig. 1.000 1.000 .487 1.000 1.000 .601 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000. 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Lower Upper N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum N2 3 8.27600 .075000 .043301 8.08969 8.46231 8.201 8.351 N4 3 6.53500 .187752 .108399 6.06860 7.00140 6.336 6.709 N6 3 7.80333 .310729 .179399 7.03144 8.57523 7.455 8.052 V1 3 6.90800 .155164 .089584 6.52255 7.29345 6.784 7.082 V2 3 5.01733 .155565 .089815 4.63089 5.40378 4.843 5.142 T2 3 6.55967 .268891 .155244 5.89170 7.22763 6.336 6.858
T4 3 6.13700 .187752 .108399 5.67060 6.60340 5.963 6.336 T5 3 5.78867 .155565 .089815 5.40222 6.17511 5.664 5.963 T6 3 8.67433 .301583 .174119 7.92516 9.42351 8.351 8.948 P3 3 7.72867 .301583 .174119 6.97949 8.47784 7.455 8.052 P5 3 7.33100 .155164 .089584 6.94555 7.71645 7.157 7.455 AM13 3 4.99267 .223500 .129038 4.43746 5.54787 4.769 5.216 Total 36 6.81264 1.180901 .196817 6.41308 7.21220 4.769 8.948 ANOVA Sau 5 ngày trên YEM Sum of Mean Squares df Square F Sig. Between (Combined) 47.662 11 4.333 90.679 .000 Groups Linear Term Contrast 1.844 1 1.844 38.598 .000 Deviation 45.817 10 4.582 95.887 .000 Within Groups 1.147 24 .048 Total 48.808 35 Homogeneous Subsets Sau 5 ngày trên YEM Subset for alpha = 0.05 Nghiem thuc N 1 2 3 4 5 6 7 Dun AM13 3 4.99267 can a V2 3 5.01733 T5 3 5.78867 T4 3 6.13700 N4 3 6.53500 T2 3 6.55967 V1 3 6.90800
P5 3 7.33100 P3 3 7.72867 N6 3 7.80333 N2 3 8.27600 T6 3 8.67433 Sig. .891 .063 .058 1.000 .679 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
Descriptives Sau 5 ngày trên mơi trương cĩ nng đ tryptophan khác nhau 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Lower Upper N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum T2.0.5 3 2.57933 .114019 .065829 2.29609 2.86257 2.455 2.679 T2.1.0 3 1.01917E1 .367905 .212410 9.27774 11.10559 9.769 10.440 T2.1.5 3 1.72813E1 .114019 .065829 16.99809 17.56457 17.157 17.381 T2.2.0 3 4.62367E1 .086025 .049667 46.02297 46.45037 46.187 46.336 T5.0.5 3 5.83757E1 .114019 .065829 58.09243 58.65891 58.276 58.500 T5.1.0 3 5.26543E1 .114019 .065829 52.37109 52.93757 52.530 52.754 T5.1.5 3 4.03157E1 .114019 .065829 40.03243 40.59891 40.216 40.440 T5.2.0 3 2.67090E1 .075000 .043301 26.52269 26.89531 26.634 26.784 T6.0.5 3 1.44453E1 .114019 .065829 14.16209 14.72857 14.321 14.545 T6.1.0 3 2.86993E1 .114019 .065829 28.41609 28.98257 28.575 28.799 T6.1.5 3 9.56890E1 .113583 .065577 95.40685 95.97115 95.590 95.813 T6.2.0 3 8.00423E1 .114019 .065829 79.75909 80.32557 79.918 80.142 P3.0.5 3 1.53657E1 .129326 .074667 15.04440 15.68693 15.291 15.515 P3.1.O 3 4.88980E1 .113583 .065577 48.61585 49.18015 48.799 49.022 P3.1.5 3 4.97187E1 .114019 .065829 49.43543 50.00191 49.619 49.843 P3.2.0 3 6.07637E1 .114019 .065829 60.48043 61.04691 60.664 60.888 P5.0.5 3 1.08733 .114019 .065829 .80409 1.37057 .963 1.187 P5.1.0 3 5.63107E1 .301583 .174119 55.56149 57.05984 56.037 56.634 P5.1.5 3 5.87487E1 .114019 .065829 58.46543 59.03191 58.649 58.873 P5.2.0 3 7.73060E1 .149000 .086025 76.93586 77.67614 77.157 77.455 V1.0.5 3 1.43707E1 .114129 .065892 14.08716 14.65418 14.246 14.470 V1.1.0 3 1.47190E1 .043301 .025000 14.61143 14.82657 14.694 14.769 V1.1.5 3 3.16843E1 .114019 .065829 31.40109 31.96757 31.560 31.784 V1.2.0 3 6.50967 .114019 .065829 6.22643 6.79291 6.410 6.634 N2.0.5 3 9.29600 .086603 .050000 9.08087 9.51113 9.246 9.396 N2.1.0 3 1.23060E1 .075000 .043301 12.11969 12.49231 12.231 12.381 N2.1.5 3 1.37490E1 .155164 .089584 13.36355 14.13445 13.575 13.873 N2.2.0 3 3.52913E1 .129326 .074667 34.97007 35.61260 35.142 35.366 N6.0.5 3 4.22133 .114019 .065829 3.93809 4.50457 4.097 4.321
N6.1.0 3 1.32760E1 .075000 .043301 13.08969 13.46231 13.201 13.351 N6.1.5 3 3.40473E1 .114129 .065892 33.76382 34.33084 33.948 34.172 N6.2.0 3 2.88483E1 .114019 .065829 28.56509 29.13157 28.724 28.948 Total 96 3.31168E1 24.677928 2.518680 28.11658 38.11700 .963 95.813 ANOVA Sau 5 ngày trên mơi trương cĩ nng đ tryptophan khác nhau Sum of Mean Squares df Square F Sig. Between (Combined) 57853.812 31 1866.252 9.961E4 .000 Groups Linear Contrast 2388.561 1 2388.561 1.275E5 .000 Term Deviation 55465.251 30 1848.842 9.868E4 .000 Within Groups 1.199 64 .019 Total 57855.011 95
Descriptives Đánh giá kh năng sinh IAA theo thi gian nuơi cy 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Lower Upper N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum T5.0.53 3 .29111 .129137 .074557 .02968 .61191 .142 .366 T5.0.54 3 2.87985E1 .129258 .074627 28.47741 29.11960 28.724 28.948 T5.0.55 3 9.51418E1 .149254 .086172 94.77102 95.51256 94.993 95.291 T5.0.56 3 5.09876E1 .113994 .065815 50.70438 51.27074 50.888 51.112 T5.0.57 3 4.36741E1 .113994 .065815 43.39095 43.95731 43.575 43.799 T5.0.58 3 3.77289E1 .113994 .065815 37.44568 38.01203 37.604 37.828 T5.0.59 3 2.95697E1 .113994 .065815 29.28647 29.85283 29.470 29.694 T5.0.510 3 2.44453E1 .113994 .065815 24.16210 24.72845 24.321 24.545 T6.1.53 3 1.01244 .113994 .065815 .72926 1.29562 .888 1.112 T6.1.54 3 5.53980 .113994 .065815 5.25662 5.82298 5.440 5.664 T6.1.55 3 1.61368E1 .113994 .065815 15.85364 16.41999 16.037 16.261 T6.1.56 3 1.84751E1 .113994 .065815 18.19195 18.75830 18.351 18.575 T6.1.57 3 2.44701E1 .074627 .043086 24.28477 24.65553 24.396 24.545 T6.1.58 3 1.69080E1 .113994 .065815 16.62478 17.19114 16.784 17.007 T6.1.59 3 9.34577 .155348 .089690 8.95986 9.73168 9.172 9.470 T6.1.510 3 4.84328 .129258 .074627 4.52219 5.16438 4.694 4.918 P5.2.03 3 4.45448E1 .074627 .043086 44.35939 44.73016 44.470 44.619 P5.2.04 3 6.17338E1 .113994 .065815 61.45065 62.01701 61.634 61.858 P5.2.05 3 8.31766E1 .113994 .065815 82.89344 83.45979 83.052 83.276 P5.2.06 3 8.61866E1 .129258 .074627 85.86547 86.50766 86.037 86.261 P5.2.07 3 8.77537E1 .129258 .074627 87.43264 88.07482 87.679 87.903 P5.2.08 3 8.46194E1 .074627 .043086 84.43402 84.80479 84.545 84.694 P5.2.09 3 8.25547E1 .113994 .065815 82.27155 82.83790 82.455 82.679 P5.2.010 3 6.31269E1 .129258 .074627 62.80577 63.44796 62.978 63.201 Total 72 4.17110E1 31.147676 3.670789 34.39169 49.03038 .142 95.291
ANOVA Đánh giá kh năng sinh IAA theo thi gian nuơi cy Sum of Mean Squares df Square F Sig. Between (Combined) 68881.953 23 2994.868 2.163E5 .000 Groups Linear Contrast 15129.981 1 15129.981 1.093E6 .000 Term Deviation 53751.972 22 2443.271 1.765E5 .000 Within Groups .665 48 .014 Total 68882.618 71